华中科大构建成功脑啡肽星形胶质细胞株

　　近日，华中科技大学同济医院麻醉学教研室徐颖博士等，在一项国家自然科学基金资助的课题中，采用分子克隆技术，构建成功一株可用于基因治疗慢性疼痛的“脑啡肽永生化大鼠星形胶质细胞株（IAST）”。

        近年来，转基因细胞移植镇痛为慢性疼痛的治疗开辟了新领域。转基因细胞移植镇痛，是将外源性镇痛物资基因导入靶细胞内，再将这种基因修饰细胞回输入机体，使其分泌具有镇痛作用的活性产物，来达到治疗之目的的。然而，传统的转基因镇痛模式不能调控镇痛物质的分泌，而外源镇痛基因在宿主体内持续表达则会带来诸多不良后果。

        为探寻一种精确调控外源基因的表达模式，研究人员以人前脑啡肽原基因（hPPE)为基础，采用分子克隆技术，将hPPE逆转录到病毒四环素反应质粒(pRevTRE/hPPE)载体上，通过病毒载体包装、荧光素酶活性检测、诱导表达及间接免疫荧光染色等系列技术处理后，成功地克隆出一株受四环素及其衍生物强力霉素定量调控表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株。

        经酶切鉴定及DNA序列检测，结果发现：该细胞株重组质粒中含有hPPE基因，诱导表达值为876.1，背景表达值为42.5，诱导倍数为20.6倍，hPPE扩增片段为950bp，强力霉素剂量与hPPEmRNA表达呈显著正相关（P<0.05）。提示新克隆的细胞株具有原病毒载体高表达特征。

        据研究人员介绍，hPPE是慢性疼痛基因治疗中较理想的选择基因，其编码的前脑啡肽原，经酶切可加工出蛋氨酸脑啡肽和亮氨酸脑啡肽，它们是一种内源性阿片肽，广泛分布于外周和中枢神经系统，是重要的镇痛介质。本研究建立的调控表达人前脑啡肽原基因的星形胶质细胞株，经进一步完善后移植到人体内，即可根据疼痛状态，人为地调控镇痛基因表达的时间和水平。因此，该细胞系的成功建立，不仅为可调控转基因细胞移植提供了理想的细胞载体，而且为人类治疗慢性疼痛这一顽疾开辟了新途径。