中科院田勇研究组Sci Rep发表CRISPR新成果

　　对于高通量筛选而言T7E1分析法既费时又费力，因此亟需一个简单有效的基因分型策略。中科院生物物理所的田勇研究员带领研究团队，开发了一种PAGE基因分型法。这一成果于九月十九日发表在Nature旗下的Scientific Reports杂志上，文章的通讯作者是中科院生物物理所的田勇研究员和Shengdi Hu。

　　

生物通报道： 动物模型对于基因功能研究起到了很大的帮助。近年来，一些新基因组编辑技术（CRISPR/Cas9、TALEN或ZFN）被用于建立动物和人类细胞模型，尤其是能进行多重基因组修饰的CRISPR/Cas9技术。CRISPR/Cas9能够快速生成多品系的实验动物，人们已经利用这一技术生成了多种动物模型，包括小鼠、大鼠、斑马鱼、兔、猪、猴。

在基因组编辑技术的推动下，建立动物和细胞模型的速度也越来越快。在这种情况下，基因分型过程成为了新的瓶颈，尤其是在进行高通量筛选时。目前，检测靶位点插入突变的技术主要有Surveyor分析、T7E1分析（T7 endonuclease 1）和HRMA（High Resolution Melt Analysis）。人们在用CRISPR/Cas9建立小鼠和大鼠模型时，主要用的是T7E1分析。

对于高通量筛选而言T7E1分析法既费时又费力，因此亟需一个简单有效的基因分型策略。中科院生物物理所的田勇研究员带领研究团队，开发了一种PAGE基因分型法。这一成果于九月十九日发表在Nature旗下的Scientific Reports杂志上，文章的通讯作者是中科院生物物理所的田勇研究员和Shengdi Hu。

研究人员通过CRISPR/Cas9系统建立了6个品系的小鼠（包括单个和多重基因组编辑小鼠），并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）法对F0至F2代的小鼠进行了基因分型。研究显示，PAGE基因分型法检测mosaic DNA的灵敏度可达0.5%。此外，研究人员还用PAGE法在人293T和iPSC中，检测了CRISPR/Cas9的脱靶情况。（延伸阅读：Science：可编程的DNA剪刀）

研究表明，PAGE分析法比T7E1更简捷高效，符合人们日益增长的需求。这种方法有望替代T7E1成为基因分析的常规方案。

作者简介：

田勇 博士 研究员 博士生导师

中科院生物物理所蛋白质科学平台首席技术专家，生物物理研究所动物实验中心主任

中国科学院核酸生物学重点实验室，交叉科学所重点实验室，创新课题组组长（兼）

1992-1997，北京医科大学临床医学学士；1997-2002，中国协和医科大学理学博士；2002-2008，美国ST JUDE儿童研究医院博士后；2009-今， 中国科学院生物物理研究所研究员

研究方向：1、第三代基因组编辑技术（CRISPR/Cas9）在疾病诱导多能干细胞定向分化体系中的应用；2、第三代基因编辑技术（CRISPR/Cas9）在模式生物动物模型研发中的应用；3、发育缺陷疾病动物模型的致病机理研究

 

生物通编辑：叶予

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