三篇Nature文章：CRISPR研究重大进展

　　大多数的人类遗传病都是由点突变——DNA序列中单个的碱基错误所引起。然而，当前的基因组编辑方法却无法高效地纠正细胞内的这些突变，还往往会导致随机核苷酸插入或缺失(indels)一类的副作用。现在，哈佛大学的研究人员已改造CRISPR/Cas9技术解决了这些问题，构建出了一种新型的“碱基编辑器”。

　　

生物通报道  大多数的人类遗传病都是由点突变——DNA序列中单个的碱基错误所引起。然而，当前的基因组编辑方法却无法高效地纠正细胞内的这些突变，还往往会导致随机核苷酸插入或缺失(indels)一类的副作用。

现在，哈佛大学的研究人员已改造CRISPR/Cas9技术解决了这些问题，构建出了一种新型的“碱基编辑器”，其能够在人类和小鼠细胞系中以低出错率永久及高效地将胞嘧啶(C)转换为尿嘧啶(U)碱基。他们的成果发布在4月20日的《自然》（Nature）杂志上。

加州大学伯克利分校基因组学创新计划科学主任Jacob Corn说：“有许多的遗传疾病你会想要置换入和置换出一些碱基。试图做到这一点是该领域一个重大的挑战，我认为这是一种真正令人兴奋的方法。”

欢迎索取锐博生物外泌体测序完全解决方案婵犵數濮烽。钘壩ｉ崨鏉戠；闁告洦鍓氶崕鐔哥節婵犲倻澧曠紒鐙€鍨堕弻銊╂偆閸屾稑顏� 闂傚倸鍊搁崐椋庣矆娓氣偓楠炲鏁撻悩鍐蹭画闂備緡鍓欑粔瀵哥不椤栫偞鐓ラ柣鏇炲€圭€氾拷

到目前为止，CRISPR/Cas9基因组编辑方法一直依赖于称作为同源介导修复(Homology-directed repair, HDR)的细胞机制，DNA双链断裂可以触发HDR。研究人员提供给细胞一个包含所需序列的模板，用Cas9酶造成靶向双链断裂，随后等待看HDR是否能够整合进这一模板重新连接DNA链。不幸地是，这种方法低效，且往往会以随机核苷酸插入或缺失形式在断裂点周围导入一些新的错误，使得它无法适用于治疗纠正点突变。

因此哈佛大学化学家和化学生物学家David Liu领导研究人员尝试了一种不同的方法（哈佛华裔牛人Nature子刊发布基因组编辑新技术，华裔学者Nature子刊提高CRISPR/Cas9基因组编辑精确度  ）。首先，他们失活了Cas9的一部分，使得它无法造成双链断裂。随后他们将Cas9与胞苷脱氨酶连接在一起，无需切割DNA胞苷脱氨酶能够直接催化C转换为U。将这一机器送入到细胞内可在靶点处造成错配的碱基对，靶DNA上包含新导入的U，反义链上为原始的鸟嘌呤(G)碱基。David Liu说：“这种错配会扭曲DNA。它造成了一个看起来不正常的、有趣的小凸起。”

这一凸起会向一种不同的细胞修复机制：错配修复发出警报，错配修复可除去其中一个错配碱基，用与剩余碱基互补的碱基来替代它。无需获得有关错误碱基的任何信息，错配修复50%的时间会将期望的G转换A；剩下的时间它会将U转换回C。

然而当检测到DNA骨架中的微小断裂（缺口）时，错配修复会整合进一步的信息。David Liu说：“细胞进化出了错配修复机器将旧DNA看得比新合成DNA更重要。新合成的DNA往往存在一些缺口。因此我们推断，我们可以操控错配修复来偏向修复我们不想要的DNA链，即包含G的DNA链。

索取Lifetech GeneArt CRISPR产品的详细技术资料请填写联系方式

该研究小组再次改造了Cas9，这一次使得它可以在未编辑的、包含G的DNA链造成一个缺口，让经编辑的、包含U的DNA保持完整。“现在细胞说，‘啊哈，这里有一个错配，错误的碱基一定是G，因为它有一个缺口必定是一条新合成的链。它将会利用另一条链作为模板，优先纠正G。”

在人类细胞的6个位点利用这一技术，研究小组报告称靶向碱基修正率达到37%，只有大约1%的序列显示核苷酸插入或缺失。相比之下，在其中三个位点测试标准Cas9编辑技术，显示不到1%的效率，且有4%以上的核苷酸插入或缺失。研究人员还证实这一技术的潜力，通过在小鼠细胞中将与阿尔茨海默病相关的APOE基因的一个变体转变为低风险的版本，纠正了疾病相关的突变。

“通过改造Cas9，他们想出了一种很好的方法来欺骗细胞偏向它通常不喜欢的信号通路，”Corn说：“由于这种方法当前只能将C-G转换为U-A碱基对，及在某些情况下编辑邻近靶点的其他C碱基，它肯定不是万能的。这意味着你现在无法治愈所有的遗传病。但有可能相当多的遗传病可纳入这一范畴。”

濠电姴鐥夐弶搴撳亾濡や焦鍙忛柣鎴ｆ绾剧粯绻涢幋娆忕仾闁稿﹨鍩栫换婵嬫濞戝崬鍓扮紓浣哄Х閸犳牠寮婚妸鈺傚亞闁稿本绋戦锟� Standard BioTools全新发布的X9™一站式微流控基因分析系统，可在单次运行中建立超过9000个独立纳升级反应体系，确保高成本效益的全面样本分析，并将人工操作的影响降至最低。欢迎索取详细资料

牛津大学的Tudor Fulga将这一技术称为是解决低效HDR，减少不必要核苷酸插入与缺失信息的“一个极其具有独创性的想法”。“我认为这将在该领域建立一个范式转变。很有可能Cas9介导的碱基编辑将在解答基础研究问题和基于基因组工程的治疗应用方面造成巨大的影响。”

在同一期的Nature杂志上还发表了另外两项研究解析了Cas9的潜在替代物：Cpf1酶。不同于Cas9双链DNA切割生成钝端，CRISPR/Cpf1生成“粘性末端”。

德国马克斯普朗克感染生物学研究所的Emmanuelle Charpentier和同事证实，不同于Cas9，Cpf1除了切割DNA还可以处理RNA。同时，哈尔滨工业大学的黄志伟（Zhiwei Huang）和同事们描述了CRISPR/Cpf1的晶体结构（哈尔滨工业大学Nature发表CRISPR研究重要成果 ）。

黄志伟说：“在细胞中粘性末端能够比钝端更有效地实现DNA修复。我们相信了解Cpf1的结构不仅将帮助我们了解Cpf1的运作机制，还有助于设计出更特异性、更高效的基因编辑工具。”

（生物通：何嫱）

生物通推荐原文索引：

D. Dong et al., “The crystal structure of Cpf1 in complex with CRISPR RNA,” Nature, doi:10.1038/nature17944, 2016.

I. Fonfara et al., “The CRISPR-associated DNA-cleaving enzyme Cpf1 also processes precursor CRISPR RNA,” Nature, doi:10.1038/nature17945, 2016.

A.C. Komor et al., “Programmable editing of a target base in genomic DNA without double-stranded DNA cleavage,” Nature, doi:10.1038/nature17946, 2016.

闂傚倸鍊搁崐鐑芥嚄閸洖绠犻柟鍓х帛閸婅埖鎱ㄥΟ鎸庣【缂佺姵褰冮湁闁挎繂鐗婇鐘绘煟椤撶偟澧﹂柡灞诲姂閹倝宕掑☉姗嗕紦

婵犵數濮烽弫鎼佸磻閻愬搫鍨傞柛顐ｆ礀缁犱即鏌熼梻瀵歌窗闁轰礁瀚伴弻娑㈩敃閿濆洩绌块悷婊呭鐢帡鎮欐繝鍥ㄧ厓閻熸瑥瀚崝銈吤瑰⿰鍫㈢暫闁哄矉缍侀幃銏ゆ偂鎼存繂鏋堟繝纰樺墲瑜板啫锕㈤柆宥呯劦妞ゆ帒鍠氬ḿ鎰版煙缁嬫寧鎲搁柍褜鍓氱粙鍫ュ疾濠靛鐒垫い鎺戝濞懷囨煏閸喐鍊愮€殿噮鍋婂畷鎺楁倷閺夋垟鍋撻柨瀣ㄤ簻闁瑰搫绉堕崝宥夋煟閿曗偓闁帮絽顫忛搹瑙勫珰闁圭粯甯╅崝澶岀磽娴ｅ壊鍎愰悽顖椻偓宕囨殾婵犻潧顑呯粻铏繆閵堝倸浜剧紓浣插亾濠㈣埖鍔栭悡鐔兼煛閸愩劌鈧摜鏁懜鍨氦婵犻潧娲ㄧ弧鈧梺姹囧灲濞佳冪摥婵犵數鍋犵亸娆愮箾閳ь剛鈧娲橀崹鍧楃嵁濮椻偓楠炲洦鎷呴悷鏉垮帪闂佽姘﹂～澶娒洪弽顬℃椽濡搁埡鍌氫患闂佹儳绻愬﹢杈╁娴犲鐓曢悘鐐插⒔閹冲懏銇勯敂濂告濞ｅ洤锕、鏇㈡晲閸モ晝鍘滈柣搴ゎ潐濞叉ê煤閻旂鈧線寮崼婵嗙獩濡炪倖鐗徊鍓х矈椤愶附鈷掑ù锝囨嚀椤曟粎绱掔拠鎻掆偓鍧楀箖瑜旈獮妯侯熆閸曨厼鏋旈柍褜鍓ㄧ紞鍡涘窗濡ゅ懏鍋傛繛鍡樺姉缁犻箖鏌ゆ總鍓叉澓闁搞倖鐟﹂〃銉╂倷鏉堟崘鈧潡鏌＄仦鐐鐎规洖鐖兼俊鎼佸Ψ閵夛附鍤堥梺璇插椤旀牠宕抽鈧畷婊堟偄閼测晛绁﹂悗骞垮劚椤︿粙寮繝鍥ㄧ厽闁挎繂鎳忓﹢鐗堢箾閸喐鍊愭慨濠勭帛閹峰懘鎸婃径澶嬬潖闂備胶鍎甸崜婵單涢崘銊ф殾鐟滅増甯楅幆鐐淬亜閹板墎绋婚柣婵堝厴濮婅櫣绮旈崱妤€顏存繛鍫熸礃閵囧嫰濡烽妷褍鈪甸梺鍝勬湰閻╊垶鐛鈧幊鐘活敆婢跺瑩婊冣攽閻愬樊鍤熷┑顖ｅ弮瀹曞綊宕奸弴鐐舵憰闂佸搫娲㈤崹褰掔嵁閵忊€茬箚闁靛牆鎷戝銉╂煕閹捐鎲鹃柡宀嬬秮婵偓闁宠桨鑳舵禒顓熺節閵忋垺鍤€婵☆偅顨呭畵鍕⒑閸︻厼顣兼繝銏★耿閿濈偤宕ㄧ€涙ḿ鍘藉┑鐐叉閼活垱绂嶉幆褉鏀介柣鎰皺濠€鎾煕婵犲啯绀嬫繝鈧笟鈧娲箰鎼达絿鐣靛┑鈽嗗亝閻熝呭垝閸懇鍋撻敐搴℃灍闁绘挸鍟伴幉绋库堪閸繄顦┑顔斤供閸橀箖鍩炲澶嬬叄闊洦鍑瑰ḿ鎰偓瑙勬礃閻擄繝寮诲☉銏犵疀闁靛⿵闄勯悵鏍ь渻閵堝倹娅囬柛蹇旓耿瀵濡搁妷銏℃杸闂佺硶鍓濋悷銉╁焻闂堟稈鏀介柍钘夋閻忕姵銇勯幋婵愭█鐎殿喛顕ч埥澶愬閻樻鍞洪梻浣烘嚀椤曨參宕曢幇顑╂盯鏁撻悩鏂ユ嫼闁荤姴娲ゅ鍫曞船婢跺ň鏀芥い鏂挎惈閳ь剚顨堥崚鎺戭潩閼哥數鍔堕悗骞垮劚閹虫劙藝閵娿儺娓婚柕鍫濇鐏忛潧鈹戦鎯у幋妞ゃ垺鐟╅獮鎺懳旀担鍙夊闂佽崵濮村ú鐘诲焵椤掑啯鐝柣蹇庣窔濮婃椽宕ㄦ繝鍐弳婵°倗濮甸幃鍌炲春閵忋倕绠婚悹鍥皺椤撴椽姊洪幐搴㈩梿婵☆偄瀚埢鎾诲Ψ閵夘喗瀵岄梺闈涚墕濡稒鏅堕鍌滅＜妞ゆ棁鍋愰悞鎼佹煕閳哄倻娲寸€殿喕绮欓、姗€鎮㈤崫鍕疄濠电姷鏁搁崑娑樜涘▎鎾崇闁哄洢鍨洪崐鍫曟煃閸濆嫬浜炴繛鍫滅矙閺岋綁骞囬鈧痪褔鏌涢悩绛硅€块柡宀€鍠栭、娑橆潩濮ｆ鍛亾濞堝灝娅橀柛锝忕到閻ｇ兘骞掗幊铏⒐閹峰懐鎲撮崟顓炵祷

10x Genomics闂傚倸鍊搁崐椋庣矆娓氣偓楠炴牠顢曢敃鈧壕褰掓煟閻旂厧浜伴柣鏂挎閹便劌顪冪拠韫婵°倗濮烽崑鐐烘偋閻樿鐏抽柡鍌濓骏閳ь剚甯楅崚濠囨偉閸撳潰 HD 闂傚倷娴囬褏鈧稈鏅犻、娆撳冀椤撶偟鐛ラ梺鍦劋椤ㄥ懐澹曟繝姘厵闁告挆鍛闂佺粯鎸诲ú姗€骞堥妸銉庣喖鎮℃惔鈥茬帛闂備浇顕х换鎺撴叏閻戣棄鐒垫い鎺戝枤濞兼劖绻涢崣澶岀煉鐎规洑鍗抽獮姗€鎳滃▓鎸庣稐闂備礁婀遍崕銈夈€冮崨瀵稿祦闁靛繆鍓濋崣蹇旀叏濡も偓濡鏅堕灏栨斀妞ゆ梻鍘ч弳锝嗘叏婵犲啯銇濈€规洏鍔嶇换婵嬪磼濠婂懏鍣┑鐘殿暯濡插懘宕戦崨顖氬灊鐎广儱顦闂佸搫鍟悧鍡欑不閻熸噴褰掓晲閸ャ劌娈屾繛瀵稿О閸ㄨ棄顫忓ú顏勭闁绘劖褰冩慨澶愭⒑閸濆嫭鍣虹紒顔芥崌楠炲啯銈ｉ崘鈺冨姸閻庡箍鍎卞Λ娑㈠储闁秵顥婃い鎰╁灪閹兼劖銇勯幋婵囧櫤闁逛究鍔戦崺鈧い鎺嗗亾闁宠鍨块幃娆戔偓娑欋缚缁嬪洤鈹戦埥鍡椾簼缂侇喗鎸绘穱濠囨偨缁嬭法鐤€闂佸搫顦悘婵嗙暤閸℃稒鈷戠紓浣骨樼紓姘舵煛娴ｈ鍊愰柟顔瑰墲閹峰懘鎼归崷顓ㄧ闯濠电偠鎻徊浠嬪箟閳ョ鑰块柣妤€鐗呯换鍡涙煟閹邦垰鐓愭い銉ヮ樀閹藉爼鎮欓悜妯煎幈閻熸粌閰ｉ妴鍐川椤栨粎鐒奸梺绯曞墲缁嬫帡鎮￠弴銏＄厓闁宠桨绀侀弳鍫㈢磽閸屾稑鍝洪柡灞界Х椤т線鏌涜箛鏃傘€掗柛鎺撳笒閳诲酣骞橀搹顐も偓顒勬倵楠炲灝鍔氭い锔垮嵆瀵煡骞栨担鍦弳闂佺粯娲栭崐鍦偓姘炬嫹

濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾绘繛鎴烆焸濞戞瑦鍎熼柕濞垮劚閻庮參姊洪崗鑲┿偞闁哄懏绮岄悾鐑藉蓟閵夛箑鈧敻鏌ㄥ┑鍡涱€楀ù婊呭仱閺屽秶绱掑Ο娲绘闂佽鍠楅〃濠囧极閹邦厽鍎熼柍銉ョ－椤旀垹绱撻崒娆愵樂闁煎疇娉涢埢宥嗘櫠娣囩殜t闂傚倸鍊搁崐椋庢濮橆兗缂氱憸宥堢亱濠德板€曢幊蹇涘疾濠靛鐓ユ繝闈涙瀹告繄绱掗悩铏叆妞ゎ厼娼￠幊婊堟濞戞﹩娼撴繝纰樻閸嬪懓鎽梺闈涙搐鐎氫即鐛Ο鍏煎磯閺夌偞澹嗛幑鏇犵磽閸屾艾鈧摜绮斿畷鍥偨婵ǹ娉涢拑鐔哥箾閹存瑥鐏╅柛鎰ㄥ亾闂備線娼ц噹闁告劧绲剧€氭稑鈹戦悩鍨毄闁稿鐩幃褎绻濋崶褍鍋嶅銈冨劤椤庢€盤R缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍊块柨鏂垮⒔閻瑩鏌熼悜姗嗘畷闁稿骸瀛╅妵鍕冀椤愵澀绮堕梺缁樺笒閻忔岸濡甸崟顖氱闁糕剝銇炴竟鏇熶繆閻愵亜鈧呯磽濮樿泛纭€闁规儼妫勭粻鏍喐閺傝法鏆︽い鎰剁畱鍞梺闈涚墕濡鍒婃导瀛樷拻濞撴埃鍋撻柍褜鍓涢崑娑㈡嚐椤栨稒娅犻柡澶嬪灍閺€浠嬫煃閵夛箑澧柛銈囧枛閺屽秷顧侀柛鎾卞妿缁辩偤宕卞☉妯碱槶濠殿喗枪濞夋稑效閺屻儲鐓冮柛婵嗗閸ｆ椽鏌涙繝鍌滀粵缂佺粯鐩獮瀣倷閸偄娅戝┑鐘愁問閸犳牠宕幘顔艰摕婵炴垯鍨圭猾宥夋煙閻愵剚缍戞い蹇ユ嫹

闂傚倸鍊搁崐椋庣矆娓氣偓楠炲鏁撻悩顔瑰亾閸愵喖骞㈡俊鐐存礀閹碱偊銈导鏉戝窛妞ゆ挾鍋熸禍浼存⒒婵犲骸浜滄繛璇у缁瑩骞掑Δ鈧崥褰掓煕閺囥劌鐏￠柣鎾跺枛閺岀喖鏌囬敃鈧晶濠氭煕閵堝洤鏋涢柡灞炬礋瀹曞ジ鎮㈢粙鍨敪婵°倗濮烽崑鐐烘偋閻樺樊鍤曢柛顐ｆ礀缁狅綁鏌ｅΟ娲诲晱闁哥偛鐖煎缁樻媴閸涘﹤鏆堥梺鑽ゅ枂閸庤精鐏嬪┑鐘绘涧濡厼岣块弽褉鏀介柣妯虹枃婢规﹢骞嗛悢鍏尖拺闂傚牊渚楀褏绱掗懠顒€甯堕棁澶愭煟閹达絽袚闁绘挾鍠栭弻锝呂熸径绋挎儓闂佸憡鏌ㄧ粔鍫曞箟閹间礁绾ч柛顭戝枟濞堝姊虹拠鈥虫灁闁稿海鏁诲顐﹀箻缂佹ɑ娅㈤梺璺ㄥ櫐閹凤拷 - 濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾块柟瀵稿Т缁躲倝鏌﹀Ο渚Ш闁哄棴闄勯妵鍕箳閹存繍浠奸梺娲诲幗椤ㄥ﹪寮诲☉銏犵労闁告劧绱曠槐鏉款渻閵堝倹娅嗛柣鎿勭節瀵鈽夐姀鐘靛姶闂佸憡鍔栭崕鍐残掗埀顒勬⒒娴ｅ憡璐￠柛搴涘€濋獮鎰偅閸愶腹鍋撻崨瀛樺€婚柦妯侯槺椤旀劙鏌℃径濠勫濠⒀呮櫕缁棃鎮介崨濠勫幈闁瑰吋鐣崹褰掓倶閵夆晜鐓冮柦妯侯樈濡偓濡ょ姷鍋為敃銏ゃ€佸☉姗嗘僵妞ゆ劑鍩勫Λ婊冣攽閻樺灚鏆╅柛瀣仱瀹曞綊宕奸弴鐐殿啇闂佸啿鎼崐濠氥€呴崣澶岀瘈濠电姴鍊搁弳鐔兼煛閸☆厾鐣甸柡宀嬬秮瀵噣宕堕…鎴滃摋缂備胶鍋撻崕鎶藉Χ閹间礁钃熸繛鎴欏灩閻掓椽鏌涢幇闈涘箹妞ゃ儲绻堝娲川婵犲啠鎷归柣銏╁灲缁绘繈鐛崘銊庢棃宕ㄩ鐔风ザ婵＄偑鍊栭幐楣冨磻濡綍锝夊箛閻楀牃鎷虹紓鍌欑劍宀ｅ潡鍩婇弴銏＄厽闁绘梹绻傚ú銈囩不椤栫偞鍊甸柨婵嗛閺嬫稓绱掗悩宕囧弨闁哄瞼鍠愮€佃偐鈧稒蓱闁款參姊虹拠鈥虫灆缂佽埖鑹鹃～蹇撁洪鍕獩婵犵數濮撮崐濠氼敄閸屾稓绡€闁冲皝鍋撻柛鏇炵仛閻や線鎮楀▓鍨灍濠电偛锕獮鍐閵堝棗浜楅柟鑹版彧缂嶅棝宕憴鍕箚闁绘劦浜滈埀顒佺墵瀵濡搁埡鍌氣偓鑸电節闂堟稓澧㈤柣婊呯帛缁绘盯骞嬪▎蹇曚痪闂佺粯鎸婚悷鈺呭箖瑜版帒惟闁靛鍠楃瑧闂備胶枪閿曘倝鈥﹂悜钘夌畺闁绘垼妫勯～鍛存煏閸繃顥犻柛妯哄船閳规垿鎮欓崣澶樻！闂佹寧宀搁弻锝堢疀鐎ｎ亜濮曢梺闈涙搐鐎氫即銆侀弴銏狀潊闁宠桨绀佹竟搴ㄦ煟鎼淬値娼愭繛鍙夌矋缁绘盯鍩€椤掑倵鍋撳▓鍨灆缂侇喗鐟╅妴渚€寮介褎鏅濋梺鎸庣箓閹冲繒鎷犻悙鐑樺€垫繛鍫濈仢閺嬬喖鏌熼鐓庘偓鍨嚕椤愶箑绠荤紓浣股戝▍銏ゆ⒑鐠恒劌娅愰柟鍑ゆ嫹

婵犵數濮烽弫鎼佸磻閻愬搫鍨傞柛顐ｆ礀缁犱即鏌熼梻瀵歌窗闁轰礁瀚伴弻娑㈩敃閿濆洩绌块悷婊呭鐢帡鎮欐繝鍐︿簻闁瑰搫妫楁禍楣冨级閳哄倻绠栫紒缁樼箞閹粙妫冨ù韬插灲閹顫濋悡搴㈢彎闂佽鍨伴張顒勫箚閺冨牆惟闁挎梹鍎抽獮姗€鏌ｆ惔銈庢綈婵炲弶鐗曠叅闁靛牆妫涢々閿嬬節婵犲倻澧涢柣鎾存礋閺岋綁骞囬鍌涙喖闁诲繐楠忕粻鎾诲蓟閻斿吋瀵犲璺号堥崑鎾寸節濮橆剛鍔﹀銈嗗笒閿曪妇绮旈悽鍛婄厱闁圭偓娼欓崫鐑樸亜閵忊剝顥堝┑陇鍩栧鍕偓锝庝簷閸栨牠姊绘担绛嬫綈濠㈢懓顑夊鎻掆槈濞嗗海绠氶梺鎯х箰濠€杈╁婵傚憡鐓忓┑鐐戝啫鏋ら柡鍡╁弮濮婃椽鎮烽弶鎸幮╅梺鐟板暱闁帮綁濡堕鍛嚤闁哄鍨归ˇ銊╂⒑闂堟丹娑㈠焵椤掑嫬纾婚柟鎯ь嚟缁♀偓濠殿喗锕╅崢楣冨储閹间焦鐓熼幖鎼灣缁夌敻鏌涚€ｎ亜顏柟渚垮姂瀹曞ジ濡烽敂鎯у箰闁诲骸鍘滈崑鎾绘煃瑜滈崜鐔风暦閻楀牊鍎熼柕濞垮劤閸樻椽姊洪崫鍕殭闁绘妫濆畷锟犲箮閼恒儳鍘藉┑鈽嗗灡鐎笛囨偟椤忓懏鍙忛柨婵嗘噹椤忣參鏌″畝瀣ɑ闁诡垱妫冩慨鈧柍鍨涙櫅椤矂姊绘担鍛婂暈婵﹤婀遍弫顕€鍨惧畷鍥ㄦ濠电娀娼ч鍡涘磻閸曨垱鐓熼柟鎯у暱椤斿倿鏌曟径鍡樻珕闁绘挶鍎甸弻锝夊即閻愭祴鍋撻崷顓涘亾濮樼偓瀚�