HPV DNA检测新方法：以致癌基因E6/E7作靶点，避免漏检

　　早期区（E区）编码蛋白基因中，由E6、E7基因编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子，编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子，这两种蛋白与细胞内两种主要抑癌蛋白p53和pRb的结合以及调控可以明显改变细胞生长周期和DNA修复，由此导致的基因组不稳定性是细胞转化和永生化的必要条件。

　　

宫颈癌简介

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率仅次于乳腺癌。近年来，宫颈癌的发展趋势逐渐偏向年轻化且呈逐年上升现象。人乳头瘤病毒( HPV)感染与宫颈癌有高度相关性，是宫颈癌的主要致病元凶，研究表明99.7% 的宫颈癌患者存在HPV感染。因此，宫颈癌筛查至关重要。宫颈癌筛查项目中，临床上以HPV检测和TCT检查较为常见。

HPV基因组介绍

HPV是一种双链的小DNA病毒，具有7900个碱基对，由病毒蛋白外壳和核心DNA物质构成，无包膜。病毒基因组分为3个部分：早期基因区（E）、晚期基因区（L）及将早期区与晚期区分开的长调控区（LCR）。调控区主要调控病毒的转录，控制病毒蛋白和感染颗粒的产生。早期区编码E6、E7、E1、E2、E4和E5蛋白质，主要参与病毒DNA的复制、转录。晚期区编码L1、L2蛋白质，分别是病毒的主要和次要衣壳蛋白[1]。

E6、E7基因的致癌机理

早期区（E区）编码蛋白基因中，由E6、E7基因编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子，编码的致癌蛋白是导致宫颈上皮癌变的重要因子，这两种蛋白与细胞内两种主要抑癌蛋白p53和pRb的结合以及调控可以明显改变细胞生长周期和DNA修复，由此导致的基因组不稳定性是细胞转化和永生化的必要条件，见下图[2]。

 
HPV导致宫颈病变的过程图示

在CIN I期及之前，HPV主要以游离状态存在于宿主细胞中，在病变进一步发展的过程中，HPV基因组会整合到宿主细胞基因组，随着病变程度的增加，HPV最终以整合状态存在。整合之后，L1基因常常丢失，而E6/E7基因持续存在。

L1 与E6/E7分别作为检测靶点的区别

从低级别病变发展为癌的过程中，HPV基因组会发生整合。在整合过程中，E6/E7基因持续存在，L1基因可能会丢失，有漏检风险。

▪ 对56个浸润性宫颈癌组织活检样本分别用L1区通用引物和E6-E7分型引物进行检测比较发现，有23个样本存在L1区缺失[3]。
▪  研究发现，HPV 18的L1/E1区更容易丢失。几乎所有的HPV18阳性的宫颈癌中病毒基因组整合到人基因组上；而HPV16阳性的宫颈癌中也有≤60%的病毒基因组发生整合[4]。
▪  一项基于15,774例病人样本的研究发现，跟型别特异性E6/E7引物PCR比较，通用引物MY09/11 PCR检测会造成10.9%（522例）的漏检；409例由MY09/11 PCR检测结果为阴性的病人中，随访发现最终有104人（25.4%）发展为CIN2+[5]。

相对于以L1基因作靶点，以E6/E7基因作检测靶点，可以避免由于HPV基因组整合到人基因上造成的漏检。因此，致癌基因E6/E7更适合作为HPV DNA检测的靶点。

[1] 胡家昌. 高危型HPVDNA与宿主基因整合及致癌机理的相关研究进展. 现代妇产科进展, 2015, 24(5):384-386
[2] CB Woodman, SI Collins, LS Young The natural history of cervical HPV infection: Unresolved issues. Nature Reviews Cancer, 2007, 7(1):11
[3] F Karlsen, M Kalantari, A Jenkins, E Pettersen, G Kristensen Use of Multiple PCR Primer Sets for Optimal Detection of Human Papillomavirus. Journal of Clinical Microbiology, 1996, 34(9):2095-2100
[4] Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide. Journal of Pathology, 1999, 189(1):12
[5] Comparison of MY09/11 consensus PCR and type-specific PCRs in the detection of oncogenic HPV types. Journal of Cellular & Molecular Medicine, 2007, 11(4):881-891