一文读懂病毒清除验证工艺在国内外新药申报中的差异

　　生物药在我国已经形成“燎原之势”，各种生物仿制药、创新药的研发、生产不断地出现在市场上。根据《药品注册管理办法》的要求，由人的、动物的组织或者体液提取的制品、动物源性单克隆抗体及真核细胞表达的重组制品，尚需增加病毒灭活工艺验证资料。

　　

生物药在我国已经形成“燎原之势”，各种生物仿制药、创新药的研发、生产不断地出现在市场上。根据《药品注册管理办法》的要求，由人的、动物的组织或者体液提取的制品、动物源性单克隆抗体及真核细胞表达的重组制品，尚需增加病毒灭活工艺验证资料。因此生产工艺中一定要包含能有效地去除/灭活这些潜在病毒工艺步骤，以确保制品的生物安全性。

现在国外申报或者中外双报的生物制品企业越来越多，国内申报与国外申报遵循的指导原则是不一样的。国内主要以《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》及《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》为主。国外以《Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin》、《Points to consider in the characterization of cell lines used to produce biologicals》、《Guideline on Virus Safety Evaluation of biotechnological Investigational Medicinal Products》为主，今天就跟大家分享一下国内外申报的差异。

国内外申报差异主要有三个方面。

1. 指示病毒的差异
国内的指导原则要求比较详细具体，明确指出了病毒的类型。规则要求：“一个典型的验证研究所选择的病毒，至少应包括单链和双链的RNA及DNA、脂包膜和非脂包膜、强和弱抵抗力、大和小颗粒等病毒；去除/灭活技术方面可根据采用的具体方法选择恰当的适宜病毒，例如SD法可选用脂包膜病毒，膜过滤法可选用粒径小的病毒，加热法可选用脂包膜和非脂包膜病毒，低pH孵放法可选用对理化因素比较耐受的指示病毒等。”
当然，选择指示病毒的核心需要以生物组织原材料、种子细胞或组织原材料匀浆、培养细胞结束时的混悬液中可能出现的污染病毒为主，结合能够用于评价验证效果的指示病毒的可获得性与相关培养试验条件进行合理选择。

国外规则没有写明病毒的具体要求，仅要求尽可能选择污染产品最相似的病毒进行验证，即特异性指示病毒；同时需要关注理化性质较宽的非特异性病毒。没有像CFDA中那样详细描述病毒的特点。

工艺步骤	指示病毒
	临床申报阶段		报产申请阶段
	国内	国外	国内	国外
低pH值孵育	X-MuLv、PRV	X-MuLv、PRV	X-MuLv、PRV	X-MuLv、PRV
纳米膜过滤	MVM、Reo-3	MVM、Reo-3	MVM、Reo-3、X-MuLv	X-MuLv、PRV、MVM、Reo-3
层析1	NA	X-MuLv、MVM	X-MuLv、PRV、MVM、Reo-3	X-MuLv、PRV、MVM、Reo-3
层析2	NA	按意愿添加	按意愿添加	按意愿添加

2. 工艺选择上的差异
国内IND申报时，一般选择低pH和膜过滤这两个工艺。国外进行申报时，除了选择低pH和膜过滤这两个工艺，还需进行层析工艺。

低pH处理法属于化学病毒去除/灭活的一种，原理是利用病毒表面的抗原在低pH值的条件下，电荷发生改变，蛋白质的空间结构也发生不可逆的改变，从而使病毒丧失与细胞受体结合的能力，阻止其侵染细胞。常用于单克隆抗体的病毒灭活工艺。一般选择3-3.7的pH处理2-24h。

膜过滤工艺是一种物理病毒去除/灭活方法，原理是选择孔径比病毒有效直径小的滤膜，对产品进行处理，将病毒与产品分离。膜过滤不能单独使用，需要与其他方法联合使用。在病毒验证时，需要综合考虑蛋白溶液的浓度、滤速、压力和过滤量等重要参数。

层析法最常用的是亲和层析和离子交换层析。层析法是目前常用的样品不同组分分离技术，利用各组分与固定相亲和力的差异或相互作用不同的原理，实现病毒与样品分离的目的。

3. 在工艺重复性方面的差异
国内的指导原则虽然没有硬性的规定，但通常需要做三个批次。在国外的指导原则中，明确指出至少分别做两次独立的研究来证实清除的可重复性，因此一般是一批样品重复两次。

病毒去除/灭活工艺验证流程涉及多个方面，比如指示病毒的选择，验证方案的选择，清除效果的判定，以及统计处理分析等。为了帮助新药申报人员选择合适的指示病毒，合理有效的开展病毒去除/灭活验证工艺，义翘神州特举办了一期“病毒去除/灭活的方法及工艺的选择”的在线课堂。
4月18日14:00，将会有义翘神州徐明明老师详细阐述更多内容！

主讲人简介：
徐明明老师在义翘神州在从事病毒清除验证工作，已有五年以上实践经验，带领团队进行超过600次病毒清除验证研究，涉及到的类型包括抗体、蛋白、疫苗等。对中国CFDA、美国FDA和ICH等的当今要求和未来趋势具有深刻的理解，可根据客户产品提供最佳的病毒清除验证方案。

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