Nature发布革新性新技术:一种无需CRISPR的基因组编辑技术

【字体: 时间:2020年07月09日 来源:生物通

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  “这项工作最有趣的方面是我们三个实验室有机地结合在一起。这不是因为有人告诉我们聚在一起做某事,而是因为科学引领了我们。”

  

在过去的十年中,基因编辑已迅速普及,借助CRISPR-Cas9等相关技术,科学家可以比以前更轻松地对DNA进行有针对性的改变,然而尽管这些先进的工具可以在细胞核中起作用,而那些隐藏在细胞的某些部分的遗传信息仍然顽固地处于CRISPR无法达到的地方。

近日,一种新的无CRISPR的工具让这种基因编辑能力到达了细胞的第二个较小的基因组——线粒体中,这是线粒体DNA的第一个精确基因编辑器。

这一发现公布在Nature杂志上,由HHMI的Joseph Mougous,哈佛大学的David Liu和麻省总医院的Vamsi Mootha三个实验室完成。

到目前为止,研究线粒体疾病的科学家们只能通过破坏细胞器,来进行线粒体DNA研究。但是,他们不能纠正单个突变,同时保持其他线粒体基因的完整性。

Mootha表示,尽管这种新工具尚不能直接用于人类,但它将使科学家更容易研究动物中的这些疾病,以及基本的线粒体生物学。“这是这一领域的一种革新性技术。现在有可能创建线粒体DNA疾病的小鼠模型,在此之前,这一直是非常困难的。”

一种不寻常的蛋白质

两年前,Mougous实验室的博士后Marcos de Moraes在分析一种毒素工作原理的时候,发现结果与他预期不同,这种毒素是一种脱氨酶,一种可通过去除氮而引起基因突变的蛋白质。

大多数脱氨酶靶向天然的单链DNA或RNA单链。这种脱氨酶很奇怪,几个月以来,de Moraes均未成功分析该蛋白质。最后他决定尝试一些他没想到的工作:双链DNA。

脱氧核糖核酸通常被发现是双螺旋,但是“似乎脱氨酶仅作用于单链脱氧核糖核酸末端。”

而这种异常的脱氨酶让他们大吃一惊——能断裂双链DNA,de Moraes说,这可能是他科学生涯中最激动人心的时刻了。

De Moraes和他的同事花了几个月的时间来确认这一最初发现,然后,Mougous意识到实验室可能正研究对基因编辑有用的东西,因此联系了Liu。

新编辑技术

Liu的团队先前已经开发了几种精密的工具,用以编辑细胞核中的DNA,其中包括可以改变单个字母的“碱基编辑器”,但是线粒体的基因编辑还十分困难。

著名的CRISPR-Cas9系统依靠一小段“引导” RNA来引导Cas9酶到基因组中的特定位置,在此处它可以剪切DNA的两条链,Liu的团队的基本编辑技术使用了相同的方法。Liu说,因为没有人知道如何将引导RNA转运到线粒体中,所以无法编辑线粒体DNA。

Mougous的新分子令人兴奋,但它是天然存在的细菌毒素,而不是现成的基因编辑器。未经检查,它可能会破坏DNA的一切,因此科学家们必须找到一种方法来防止脱氨酶改变DNA,直到到达正确的位置。

解决方案是:将蛋白质分成两个无害的部分,研究人员依照3D成像数据将蛋白质分为两个部分,他们将每个脱氨酶的一半融合到不需要引导RNA的可定制DNA靶向蛋白上,这些蛋白与特定的DNA片段结合,将两半结合在一起,从而使脱氨酶恢复功能,并作为一种蛋白质发挥作用。

Liu的团队使用这项技术对特定的线粒体基因进行了精确的改变,之后专注于线粒体生物学的Mootha实验室进行了测试,查看这些编辑是否具有预期的效果。

Mootha说:“您可以想象,如果将编辑工具引入线粒体中,可能会造成某种灾难。但是结果表明它非常精确。”整个线粒体功能良好。

刘说:“这项工作最有趣的方面是我们三个实验室有机地结合在一起。这不是因为有人告诉我们聚在一起做某事,而是因为科学引领了我们。”

(生物通)

原文标题:

Beverly Y. Mok et al. "An interbacterial cytidine deaminase toxin enables mitochondrial base editing." Nature. Published online July 8, 2020.



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