靶向c-Myc联合Ras抑制剂Salirasib重塑肿瘤微环境并增强三阴性乳腺癌免疫治疗疗效

　　本研究揭示了三阴性乳腺癌（TNBC）中c-Myc与Ras信号通路的协同致癌作用。通过药物文库筛选发现Ras抑制剂Salirasib与c-Myc靶向抑制具有显著协同效应，可诱导G1/S期阻滞和细胞凋亡，并证实MCM2介导的DNA复制抑制是关键机制。体内实验证明该联合策略能有效抑制肿瘤生长和肺转移，并通过重编程肿瘤免疫微环境（TME）显著增强PD-L1阻断剂的治疗效果，为TNBC的免疫联合治疗提供了新策略。

　　

3.1 Ras抑制剂Salirasib在c-Myc敲低条件下诱导TNBC细胞系的合成致死效应

研究团队通过筛选四种TNBC细胞系中的c-Myc表达水平，最终选择人源MDA-MB-231和Hs578T细胞进行体外研究，以及鼠源Py8119细胞进行体内验证。为了识别与c-Myc抑制具有合成致死效应的药物，研究人员采用靶向c-Myc的shRNA构建稳定敲低细胞系，并选用包含121种细胞周期抑制剂的化合物文库进行系统筛选。

筛选策略分为三个关键阶段：首先评估各化合物对c-Myc敲低TNBC细胞增殖的抑制潜力；随后选择使细胞活力比（shControl/shc-Myc）超过1.5的化合物作为协同作用候选；最后在多种细胞系中进行验证。结果显示，Salirasib和6H05两种Ras抑制剂在两种TNBC细胞中均表现出高度一致的协同效应。值得注意的是，6H05作为突变选择性抑制剂，主要靶向KRAS(G12C)突变，而本研究使用的细胞系携带的是KRAS(G13D)和HRAS(G12D)突变，其抑制作用更可能是剂量依赖的脱靶效应。

3.2 Salirasib与c-Myc抑制协同抑制TNBC细胞增殖

通过CCK-8细胞增殖实验验证发现，Salirasib在c-Myc敲低细胞中表现出更强的抑制效果。10μM浓度的Salirasib对shc-Myc细胞的抑制效果显著高于对照组。EdU细胞增殖实验和克隆形成实验进一步证实，Salirasib与c-Myc敲低联合使用能够产生协同抗增殖效应，显著优于单药治疗。

3.3 靶向c-Myc联合Salirasib协同诱导G1/S期阻滞和细胞凋亡

流式细胞术分析显示，联合治疗组细胞在G1/S期阻滞显著增加。这种细胞周期阻滞进而导致显著的细胞凋亡，联合治疗组的凋亡率显著高于单药治疗组。Western blot分析显示，联合治疗组中促凋亡蛋白BAX表达上调，而抗凋亡蛋白BCL-2表达下调，表明该联合策略通过调节凋亡相关蛋白表达增强肿瘤细胞凋亡。

3.4 靶向c-Myc联合Salirasib协同抑制TNBC细胞侵袭和迁移

Transwell实验显示联合治疗组细胞侵袭能力显著抑制。伤口愈合实验表明联合治疗组细胞迁移能力明显降低。进一步对迁移相关蛋白表达分析发现，E-cadherin表达增强，而MMP-9、MMP-2和Vimentin表达受到抑制。这些结果表明联合治疗能有效抑制TNBC细胞的侵袭和迁移能力。

3.5 MCM2是共靶向c-Myc和Ras信号诱导合成致死效应的关键介质

基于TCGA数据库的分析发现，MYC和KRAS高表达与TNBC患者不良预后显著相关。RNA-seq分析鉴定出3714个差异表达基因（DEGs），KEGG富集分析显示上调DEGs富集于凋亡和免疫相关通路，而下调DEGs富集于细胞周期、DNA复制、MAPK和Ras信号通路。MCM2被确定为关键下游效应因子，其在双高MYC/KRAS表达组中显著高表达，且与MYC表达呈正相关，低MCM2表达与更好的总生存期相关。

机制研究表明，c-Myc直接结合MCM2启动子区域调节其转录。荧光素酶报告基因实验和ChIP实验证实c-Myc对MCM2启动子的直接调控作用。救援实验证实，过表达MCM2能够逆转联合治疗引起的细胞活力抑制、G1/S期阻滞和细胞凋亡，证明MCM2在该协同效应中的核心作用。

3.6 靶向c-Myc与Salirasib协同增强体内免疫治疗效果

在原位TNBC小鼠模型中，联合治疗组（shc-Myc+Salirasib+PD-L1抑制剂）表现出最佳的肿瘤抑制效果。免疫组化分析显示，联合治疗组Ki-67表达最低而TUNEL表达最高，表明增殖抑制和凋亡诱导效果最强。MCM2表达在联合治疗组中显著降低。

肿瘤免疫微环境分析显示，联合治疗组中CD11b⁺CD80⁺ (M1样)巨噬细胞增加，而CD11b⁺CD206⁺ (M2样)巨噬细胞减少，表明肿瘤相关巨噬细胞向抗肿瘤M1表型复极化。在肺转移模型中，联合治疗组表现出最显著的肺转移抑制效果。安全性评价显示联合治疗未引起显著毒性反应，表明其良好的安全性。

4 讨论

本研究通过系统性的药物筛选和机制研究，揭示了c-Myc与Ras信号通路在TNBC中的协同作用。Salirasib与c-Myc靶向抑制的联合使用通过抑制MCM2介导的DNA复制，诱导细胞周期阻滞和凋亡，同时重编程肿瘤免疫微环境，显著增强PD-L1抑制剂的治疗效果。这些发现为TNBC的治疗提供了新的联合策略，具有重要的临床转化价值。

5 结论

本研究证实了靶向c-Myc与Ras抑制剂Salirasib在TNBC中的协同抗肿瘤效应。该联合策略通过抑制MCM2表达，诱导细胞周期阻滞和凋亡，并重编程肿瘤免疫微环境，显著增强免疫治疗效果。这为c-Myc阳性TNBC患者的治疗提供了新的有效策略。