栀子苷通过PPARγ信号通路诱导M2型巨噬细胞极化稳定动脉粥样硬化斑块的作用及机制研究

　　本研究揭示了中药活性成分栀子苷（Gen）通过激活PPARγ信号通路诱导巨噬细胞向M2抗炎表型极化，显著降低动脉粥样硬化（AS）斑块炎症反应并增强斑块稳定性。实验证实Gen能上调CD163、IL-10等M2标志物表达，并通过调控CD36、ABCG1等靶基因改善脂质代谢。该研究为AS的药物治疗提供了新靶点和天然药物研发策略。

　　

研究背景与意义

动脉粥样硬化（AS）作为冠状动脉心脏病（CHD）的主要病因，其斑块不稳定性是急性血管内血栓形成的关键诱因。当前他汀类药物虽作为一线治疗药物，但仍存在残留风险和副作用问题。本研究聚焦于中药栀子活性成分栀子苷（Geniposide, Gen）的抗AS机制，前期研究发现其能调节巨噬细胞极化并稳定斑块，但具体作用通路尚未明确。

作用机制假设

鉴于过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）在巨噬细胞极化中的核心调控作用，研究提出科学假设：Gen可能通过激活PPARγ信号通路诱导巨噬细胞向M2抗炎表型极化，从而发挥斑块稳定作用。

实验设计与方法

研究采用体外体内相结合的策略：

• 体外实验使用RAW264.7巨噬细胞系，通过CCK-8法检测细胞活性确定Gen给药浓度（5-20μM），采用免疫荧光染色检测M1/M2标志物（iNOS/Arg-1），RT-qPCR和Western blot分析基因和蛋白表达，荧光素酶报告基因检测PPARγ活性

• 体内实验采用ApoE^?/?小鼠高脂饮食诱导AS模型，给予Gen（25mg/kg/d）和PPARγ拮抗剂GW9662（1mg/kg/d）干预8周，通过血脂检测、炎症因子ELISA、主动脉组织H&E染色、Oil Red O染色和免疫组化进行评价

关键研究发现

Gen诱导巨噬细胞M2极化

体外实验显示：20μM Gen显著增强M2标志物Arg-1荧光强度，上调CD163和IL-10基因表达（p<0.05），而对M1标志物CCR7、IL-1β无显著影响，表明Gen特异性促进M2极化。

Gen激活PPARγ信号通路

荧光素酶报告基因检测证实Gen剂量依赖性激活PPARγ，20μM效果与激动剂罗格列酮（RGZ）相当。RT-qPCR显示Gen上调PPARγ靶基因CD36和ABCG1表达，且该效应可被GW9662阻断。Western blot分析发现Gen处理120-180分钟后：

• 胞浆中磷酸化PPARγ水平显著升高

• 核内总PPARγ蛋白表达增加

• 磷酸化PPARγ核质转移现象表明Gen通过促进PPARγ磷酸化及核转位激活通路

PPARγ调控M2极化的关键作用

PPARγ激动剂RGZ显著诱导Fizz-1、Ym-1、Arg-1表达，而拮抗剂GW9662完全逆转此效应。通过腺病毒过表达PPARγ可直接上调M2标志物表达，证实PPARγ对M2极化的转录调控作用。

Gen通过PPARγ依赖途径促进M2极化

GW9662预处理显著抑制Gen诱导的Fizz-1、Ym-1、Arg-1表达上调（基因和蛋白水平），证明Gen促进M2极化的效应完全依赖PPARγ激活。

体内抗AS效应验证

动物实验表明：

• Gen显著降低AS模型小鼠血清TC、TG、LDL-C水平（p<0.05）

• 下调炎症因子IL-1β、IL-6、IL-17A表达

• H&E和Oil Red O染色显示Gen组主动脉斑块面积显著减少

• 免疫组化显示Gen降低巨噬细胞标志物MOMA-2表达，增加PPARγ和Arg-1表达

• 所有效应均被GW9662逆转，证实PPARγ通路的核心介导作用

机制创新性与临床意义

研究首次揭示：

• Gen通过促进PPARγ磷酸化及核转位激活信号通路

• 调控下游CD36、ABCG1等靶基因表达

• 诱导巨噬细胞向M2抗炎表型极化

• 实现血脂调节、炎症抑制和斑块稳定多重效应

该发现为AS治疗提供了新思路：

• 阐明天然药物多靶点作用机制

• 验证PPARγ作为治疗靶点的临床价值

• 为中药活性成分治疗心血管疾病提供实验依据

研究局限与展望

需进一步研究：

• Gen体内代谢产物药理活性

• PPARγ上下游信号网络精细调控机制

• 临床前药效学和药代动力学特征

为开发基于栀子苷的AS治疗新药奠定理论基础。