利用多色流式细胞术鉴定卵巢皮质细胞亚群：为卵巢组织自体移植提供质量评估新策略

　　本研究针对卵巢组织自体移植中移植物质量评估的难题，开发了基于多色流式细胞术（MFC）的卵巢细胞亚群鉴定技术。通过对多囊卵巢综合征患者的新鲜/冻融卵巢组织进行解离分析，首次量化了内皮细胞（CD34+/CD31+）、间充质细胞（Vimentin+）和周细胞（CD146+/CD140b+）等关键亚群的比例，为评估卵巢功能恢复潜力提供了新型细胞学指标。

　　

随着癌症治疗技术的进步，患者生存率显著提高，但化疗和放疗导致的早发性卵巢功能不全已成为严峻挑战。卵巢组织冷冻保存（OTC）和自体移植技术为无法延迟治疗的女性及青春期前女孩提供了生育力保存的希望，全球已有超过200例通过该技术成功分娩的案例。然而，这项技术面临两大瓶颈：一是移植可能重新引入恶性肿瘤细胞，特别是对于白血病等易转移至卵巢的疾病；二是移植物质量参差不齐，包括存活卵泡数量不足和基质微环境缺陷，后者直接影响卵泡发育与移植后血管重建。

为解决上述问题，法国贝桑松大学医院的研究团队在《Journal of Ovarian Research》发表了一项创新研究，通过多色流式细胞术（MFC）系统解析了卵巢皮质中的细胞组成，为评估卵巢组织质量提供了新视角。

研究采用多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢钻孔术获取的皮质组织，通过机械-酶解法（GentleMACS Octo解离系统）解离组织，使用8色流式细胞仪分析细胞存活率、得率及表面标志物表达。关键抗体组合包括：CD34-PE-Cy7/CD31-PE/CD144-BV421（内皮/祖细胞）、Vimentin-FITC（间充质细胞）、CD326-BV510（上皮细胞）、CD146-BV421/CD140b-BV510/CD90-APC（周细胞）。通过FVS780⁺/CD45^low设门策略排除造血细胞，精准识别卵巢特异性细胞群。

细胞得率与存活率分析

冻融组织解离后的细胞得率（1.08×10⁶细胞/100mg）显著低于新鲜组织（1.59×10⁶细胞/100mg）（p=0.0195），但存活率反而更高（84.7% vs 84.4%, p=0.0367），证明冻存过程虽减少细胞数量但未显著损害存活质量。

单参数细胞亚群鉴定

在CD45^low卵巢细胞中，CD34⁺细胞占比34%（内皮/祖细胞），CD31⁺细胞占7.8%（内皮细胞），CD144⁺细胞占5.3%（血管内皮钙黏蛋白阳性细胞），Vimentin⁺细胞占25.6%（间充质细胞），CD326⁺细胞仅0.7%（上皮样细胞）。

多参数细胞亚群精确定位

通过组合标志物发现：CD31⁺/CD144⁺双阳性内皮细胞占比3.6%，符合文献报道的卵巢内皮细胞比例；CD34^?/Vimentin^?/CD31^?/CD146⁺/CD140b⁺/CD90⁺周细胞群体占比4.8%，该类细胞兼具内皮与间充质特征，可能参与血管稳定与组织修复。

本研究首次建立基于MFC的卵巢细胞亚群定量分析流程，证实冻融卵巢组织仍保留高活性细胞群体。通过多标志物组合策略，成功区分内皮细胞、周细胞和间充质细胞等关键功能群体，为卵巢组织质量评估提供了超越传统卵泡计数的细胞学标准。未来该技术可整合微小残留病（MRD）检测与功能评价，优化自体移植前风险评估；同时为人工卵巢构建、细胞分选移植等再生医学方案提供细胞来源鉴定依据。尽管需进一步扩展抗体面板（如颗粒细胞标志物），MFC已成为连接基础研究与临床应用的桥梁，推动卵巢组织保存技术向精准化发展。