基于UHPLC-MS/MS技术的胃癌细胞核苷类代谢物全谱分析及其肿瘤演进标志物发现

　　本研究开发了新型超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）方法，成功实现27种内源性核苷类化合物（含经典核苷、修饰核苷及单核苷酸）的同步检测，揭示了不同分化程度胃癌细胞（NCI-N87/SGC-7901/MGC-803）中核苷代谢的动态变化规律，为胃癌进展机制研究提供了新型代谢标志物。

　　

Highlight

质谱条件优化

为获得各分析物的高灵敏度，将含0.1%甲酸的甲醇-水混合液通过T型连接器与灌注液混合以模拟色谱条件。去簇电压（DP）和碰撞能量（CE）对优化多反应监测（MRM）参数至关重要。所有分析物的MRM跃迁均在正离子检测模式下优化，各分析物均产生质子化分子[M+H]⁺。通过自动优化工具结合手动微调获得最佳灵敏度，最终MRM参数详见表S1。

结论

本研究开发并验证了一种灵敏可靠的UHPLC-MS/MS方法，用于同步测定细胞样本中的12种经典核苷（T/dU/U/A/dA/C/dC/G/dG/I/次黄嘌呤/黄嘌呤核苷）、11种修饰核苷（Cm/m5U/Am/Um/ac4C/m5C/m6A/m6G/5-methyl-dC/6-methyluracil/8-hydroxy-dG）和4种单核苷酸（CMP/dCMP/AMP/UMP）。采用HSS T3色谱柱结合MRM模式的MS/MS检测，在13.0分钟分析周期内有效分离了27种核苷类化合物。方法的定量限为0.2-25.0 ng/mL，日内精密度低于8.2%，日间精密度低于14.2%，所有分析物的准确度在89.9-112.2%之间。该方法成功应用于分析不同分化程度胃癌细胞（NCI-N87/SGC-7901/MGC-803）的代谢谱，揭示了与肿瘤进展相关的显著核苷酸代谢改变，并识别出胃癌进展的潜在生物标志物。

声明

无

资助

本研究由国家自然科学基金（编号U21A20416）、河南省科技攻关项目（编号232102311116）和国家药监局重点实验室项目（编号KF202405）资助。

作者声明

作者确认已审阅并同意提交稿件的最终版本。本文系作者原创作品，未曾在其他刊物发表且未处于其他刊物审稿流程中。

CRediT作者贡献声明

刘红民： 文稿审阅-编辑/项目管理/概念化

李娟： 文稿审阅-编辑/初稿撰写/项目管理/方法论/形式分析/概念化

陈铎： 可视化/数据策管

刘梦雪： 可视化/数据策管

何曼妮： 可视化/数据策管

周飘： 验证/方法论/调研

利益冲突

作者声明无竞争利益

竞争利益声明

作者声明不存在可能影响本研究结果的已知竞争性经济利益或个人关系