苦杏仁苷通过激活VIPR1/cAMP/PKA通路保护流感病毒诱导的肺泡上皮屏障损伤机制研究

　　本研究针对病毒性肺炎中肺泡上皮屏障损伤的临床难题，揭示了苦杏仁关键活性成分苦杏仁苷（amygdalin）通过靶向血管活性肠肽受体1（VIPR1）激活cAMP/PKA信号通路，促进肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT2）增殖、上调表面活性蛋白A（SP-A）和水通道蛋白5（AQP5）表达，从而修复屏障功能。该研究为中药复方宣白承气汤（XCD）治疗流感病毒肺炎提供了药效物质基础和机制阐释，为靶向神经内分泌调节的肺保护策略提供了新思路。

　　

病毒性肺炎是全球范围内发病率和死亡率较高的呼吸道疾病，其中甲型流感病毒（IAV）是导致重症肺炎的主要病原体。当前临床治疗手段包括抗感染、器官支持及免疫调节，但对肺泡-毛细血管屏障（气-血屏障）的保护策略仍显不足。病毒复制直接破坏肺泡上皮紧密连接，促炎细胞因子风暴进一步加剧屏障损伤，而缺氧和氧化应激反应导致肺水肿形成，最终进展为呼吸衰竭和多器官损伤。因此，开发能够保护肺泡上皮屏障并促进修复的新型药物成为研究热点。

在此背景下，传统中药复方宣白承气汤（Xuanbai-Chengqi decoction, XCD）在临床应用中显示出对肺炎和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的改善作用，但其药效物质基础及机制尚未明确。该复方中的苦杏仁（Armeniacae Semen Amarum）是常用止咳平喘中药，本研究团队前期发现XCD可保护流感感染小鼠的肺泡和肠道屏障，但苦杏仁在其中具体贡献及其活性成分的作用机制亟待阐明。

为系统解析苦杏仁的药效物质，研究团队采用“复方-单药-成分”的递进筛选策略：首先通过体内实验证实去除苦杏仁的XCD（XCD-Ak）失去对IAV感染小鼠肺指数、病毒复制和IL-6表达的抑制作用，表明苦杏仁不可或缺；进而通过体外活性导向筛选发现苦杏仁中的氰苷类成分苦杏仁苷（amygdalin）具有抗炎、抗缺氧、抗病毒和促进内皮细胞迁移的多重活性；最终在IAV感染小鼠模型中验证100 mg/kg苦杏仁苷可显著减轻肺损伤、抑制病毒复制、调节IL-6/IL-10平衡，并促进肺泡上皮屏障修复。

研究采用多项关键技术方法：通过表面等离子共振（SPR）联用液相色谱-质谱（LC-MS）筛选苦杏仁苷作用靶点；利用分子对接验证苦杏仁苷与VIPR1的结合；通过免疫组化、RT-qPCR和Western blot分析屏障相关标志物（SP-A、AQP5、AT1/AT2细胞）；采用ELISA检测cAMP/VIP含量；使用VIPR1拮抗剂（4Cl-D-Phe6, Leu17）-VIP进行功能回复实验验证通路机制。实验所用IAV病毒株（A/FM/1/47）和细胞模型（RAW264.7、HUVEC、ANA-1）均来自标准库，小鼠模型采用BALB/c雄性小鼠经2LD₅₀病毒滴度感染构建。

苦杏仁苷在体外展现多重生物活性

苦杏仁苷在50μM浓度以下对细胞无毒性，并能显著抑制LPS诱导的巨噬细胞NO产生（P<0.01），减轻缺氧对HUVEC的损伤（P<0.01），抑制IAV在A549细胞中的复制（P<0.05），并促进内皮细胞划痕愈合（P<0.05）。这些结果表明苦杏仁苷可同时应对病毒肺炎微环境中的炎症、缺氧、病毒复制和屏障修复需求。

苦杏仁苷减轻IAV感染小鼠的肺损伤

体内实验显示，100 mg/kg苦杏仁苷处理显著改善IAV感染小鼠的体重下降（P<0.05）、肺水肿（肺指数降低）和病理损伤（肺泡结构破坏和炎症浸润减轻），其效果与阳性药奥司他韦相当。同时，苦杏仁苷下调肺组织IL-6 mRNA表达（P<0.05）并上调IL-10（P<0.05），表明其调节免疫平衡的作用。

苦杏仁苷保护肺泡上皮屏障完整性

免疫荧光和Western blot分析表明，苦杏仁苷处理显著增加肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT2）数量（P<0.001）并上调表面活性蛋白A（SP-A）和水通道蛋白5（AQP5）的表达（P<0.05），但对肺泡Ⅰ型上皮细胞（AT1）标志物podoplanin无显著影响。这说明苦杏仁苷主要通过促进AT2细胞增殖和功能蛋白表达来增强屏障功能和液体清除能力。

苦杏仁苷靶向VIPR1激活cAMP/PKA通路

SPR/LC-MS筛选出121个潜在靶蛋白，其中血管活性肠肽受体1（VIPR1）因与肺神经内分泌调节相关成为重点研究对象。分子 docking显示苦杏仁苷与VIPR1结合良好（Vina得分-9.5 kcal/mol）。体外实验中，VIPR1拮抗剂逆转了苦杏仁苷的抗炎作用（P<0.05）。在体内，苦杏仁苷上调肺组织VIPR1表达（P<0.05）但不影响内源性VIP水平，同时显著提高cAMP含量（P<0.05）及PKA/p-PKA蛋白表达（P<0.01）。而联合VIPR1拮抗剂处理后，苦杏仁苷对肺指数、cAMP和PKA激活的促进作用均被抵消，证实苦杏仁苷通过结合VIPR1受体激活cAMP/PKA/p-PKA信号通路。

本研究结论表明，苦杏仁苷作为苦杏仁的关键活性成分，通过靶向VIPR1受体模拟内源性血管活性肠肽（VIP）的功能，激活cAMP/PKA信号级联，从而发挥抗炎、促进肺泡修复和屏障保护的多重作用。该研究不仅阐明了XCD复方的药效物质基础，还为病毒性肺炎治疗提供了靶向神经内分泌调节的新策略。值得注意的是，苦杏仁苷的氰苷特性带来潜在安全性问题，但本研究剂量（100 mg/kg）下未观察到明显毒性，且药代动力学研究显示其代谢产物普鲁纳辛（prunasin）在肺中特异性蓄积，为后续剂型开发提供依据。未来研究需进一步探索苦杏仁苷与其他XCD成分的协同效应，以及VIPR1介导的β-arrestin信号通路在屏障修复中的作用。

该研究成果发表于《Chinese Medicine》（2025年第20卷），为中药抗病毒机制研究提供了从复方到成分、从表型到靶点的完整范式，对促进中医药现代化和国际应用具有重要参考价值。