评估琼脂稀释法作为Butzleri弧菌药敏检测及ECOFF值确定的可靠替代方案

《Scientific Reports》：Evaluation of agar dilution as an alternative method for antimicrobial susceptibility testing and tentative ECOFF determination for Arcobacter butzleri

　　本刊推荐：为解决Butzleri弧菌缺乏标准化药敏检测方法和明确判读标准的问题，研究人员开展了一项评估琼脂稀释法作为肉汤微量稀释法替代方案的研究。结果表明，在需氧条件下24小时孵育的琼脂稀释法与参考方法高度一致，并首次提出了针对该菌的暂定流行病学界值（ECOFF），为Arcobacter spp.的耐药监测提供了重要技术支撑。

　　

在微生物耐药性监测领域，一个令人困扰的问题一直存在：对于那些新发病原体，我们往往缺乏标准化的检测方法和科学的判读标准。Arcobacter butzleri（布氏弓形杆菌）就是这样一个典型代表——这种与人类胃肠道疾病相关的新发人畜共患病原体，由于缺乏实用的抗菌药物敏感性试验（AST）方法和明确的判读标准，其耐药性信息一直较为有限。

这种现状给临床治疗和公共卫生监测带来了巨大挑战。当患者出现严重弧菌病症状时，医生往往需要凭经验选择抗生素，而公共卫生部门也难以准确掌握该菌的耐药趋势。更复杂的是，Arcobacter spp.与Campylobacter（弯曲菌）在表型和基因型上具有诸多相似性，导致长期以来许多实验室直接套用弯曲菌的药敏检测方法和判读标准，这种做法可能产生误导性结果。

为了解决这一难题，来自泰国朱拉隆功大学的研究团队在《Scientific Reports》上发表了一项重要研究，系统评估了琼脂稀释法作为Butzleri弧菌药敏检测的替代方案，并首次提出了针对该菌的暂定流行病学界值（ECOFF）。

关键技术方法

本研究以CLSI兽医AST分会批准的肉汤微量稀释法为参考方法，对415株分离自曼谷各类肉源的Butzleri弧菌进行了药敏检测。研究人员比较了不同条件下（需氧24/48小时、微需氧48小时）琼脂稀释法与参考方法的一致性，使用Cohen's kappa和Gwet's AC1统计指标进行评估。通过整合当前与既往研究的MIC分布数据，采用视觉估计和ECOFFinder统计工具确定了针对环丙沙星、红霉素、庆大霉素和四环素的暂定ECOFF值。

研究结果

MIC分布特征

参考方法与琼脂稀释法对环丙沙星、红霉素和四环素的MIC结果显示出相同或仅相差一个稀释倍数的模式值，而微需氧条件下庆大霉素的模式值比参考方法高出三个稀释倍数，表明测试条件对氨基糖苷类药物活性影响显著。

暂定ECOFF值确定

通过整合符合EUCAST标准的多项研究数据，确定的暂定ECOFF值为：环丙沙星0.5μg/ml、红霉素16μg/ml、庆大霉素2μg/ml、四环素16μg/ml。与弯曲菌的现有折点相比，红霉素和四环素的ECOFF值显著更高，凸显了建立Arcobacter特异性判读标准的重要性。

方法学一致性评估

需氧条件下24小时琼脂稀释法（AAD24）与参考方法的一致性最高，kappa值显示极好的一致性（>0.80）。Gwet's AC1值在所有测试方法中保持稳定高位，表明即使在kappa值较低的情况下仍存在实质一致性。必需一致性（EA）在±1个稀释倍数范围内，环丙沙星和红霉素在AAD24和AAD48条件下均超过90%，而庆大霉素在所有方法中均较低，特别是在微需氧条件下降至约5%。

研究结论与意义

本研究证实了琼脂稀释法，特别是在需氧条件下37°C培养24小时，可作为Butzleri弧菌药敏检测的可靠替代方法。该方法适用于处理大量样本且对专用设备依赖较小，对资源有限实验室尤为有利。提出的暂定ECOFF值为该菌的耐药监测提供了重要参考框架，解决了长期依赖弯曲菌折点可能导致的误判问题。

研究结果还揭示了测试条件对药敏结果的重要影响：氨基糖苷类药物在需氧条件下活性更高，而四环素受氧气条件影响较小。这表明直接套用弯曲菌检测方法可能不适用于Arcobacter spp.，强调了建立物种特异性检测标准的重要性。

这项研究为标准化Butzleri弧菌药敏检测流程迈出了关键一步，为新发人畜共患病原体的耐药性监测和临床治疗决策提供了科学依据。未来研究需要纳入更广泛的菌株来源和分子特征分析，以进一步完善Arcobacter spp.的药敏检测体系。