时间分辨荧光免疫分析法提升低滴度抗PLA2R抗体阳性原发性膜性肾病诊断灵敏度的研究

《Scientific Reports》：Time-resolved fluoroimmunoassay improves sensitivity in the diagnosis of primary membranous nephropathy with low phospholipase A2 receptor antibody titer

　　本研究针对原发性膜性肾病（PMN）患者血清抗磷脂酶A2受体（PLA2R）抗体低滴度（2-20 RU/ml）时传统ELISA法灵敏度不足的临床难题，通过对比时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）与ELISA的诊断效能，发现TRFIA对PLA2R-IgG及IgG4亚型的检测灵敏度显著优于ELISA（AUC分别达0.829和0.814），且通过优化临界值可进一步提升诊断准确性。该研究为低抗体滴度PMN患者提供了非侵入性诊断新策略，有望减少肾活检依赖，具有重要临床转化价值。

　　

原发性膜性肾病（PMN）是成人肾病综合征的常见类型，其发病与抗磷脂酶A2受体（PLA2R）自身抗体密切相关。尽管肾活检是诊断PMN的金标准，但作为侵入性操作，其出血和感染风险不容忽视。近年来，血清抗PLA2R抗体检测已成为PMN诊断的重要替代手段，其中酶联免疫吸附测定（ELISA）法因操作标准化而广泛应用。然而，当抗体滴度处于2-20 RU/ml的低水平时，ELISA的灵敏度显著下降（部分研究报道仅0-50%），导致许多患者仍需依赖肾活检确诊，临床诊断面临严峻挑战。

为解决这一难题，北京大学第三医院肾脏内科邓振玲团队联合浙江理工大学黄彪课题组，在《Scientific Reports》发表研究，系统评估了时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）在低滴度抗PLA2R抗体患者中的诊断价值。研究回顾性纳入2018年至2024年175例血清抗PLA2R抗体为2-20 RU/ml的患者，其中91例经肾活检确诊为PMN。通过对比TRFIA与ELISA对PLA2R-IgG及其IgG4亚型的检测性能，发现TRFIA不仅灵敏度更高，还能通过优化临界值显著提升诊断准确性。

研究采用回顾性队列设计，以肾活检结果为金标准，对比TRFIA与ELISA的诊断效能。关键技术方法包括：

1. 1.
   患者队列构建：从1762例接受肾活检的患者中筛选出175例抗PLA2R抗体为2-20 RU/ml者，涵盖PMN、IgA肾病、微小病变病等多种病理类型；
2. 2.
   抗体检测：使用商业化TRFIA试剂盒（浙江博圣生物）定量检测血清PLA2R-IgG和PLA2R-IgG4，并以ELISA（德国欧蒙试剂）结果为对照；
3. 3.
   统计分析：通过受试者工作特征（ROC）曲线评估诊断效能，采用多因素逻辑回归分析抗体与PMN的独立关联性。

研究结果

1. 患者基线特征与PMN关联性

PMN患者年龄更大，且24小时尿蛋白（24 h-UTP）、血红蛋白（HGB）、总胆固醇（TC）等指标显著高于非PMN组（p<0.001），而血清白蛋白（ALB）、IgG等水平较低，提示PMN患者代谢紊乱及免疫异常更明显。

2. TRFIA显著提升低滴度抗体检测灵敏度

基于制造商推荐的临界值（PLA2R-IgG-TRFIA≥14 RU/ml，PLA2R-IgG4-TRFIA≥200 ng/ml），TRFIA对PMN的诊断灵敏度达14.3%（IgG）和34.1%（IgG4），而ELISA灵敏度为0%。尤其在抗体滴度2-7 RU/ml的亚组中，PLA2R-IgG4-TRFIA灵敏度（22.9%）远超PLA2R-IgG-TRFIA（4.2%）。

3. 优化临界值进一步优化诊断效能

通过ROC曲线分析，PLA2R-IgG-TRFIA最佳临界值调整为0.44 RU/ml时，灵敏度/特异性达83.3%/82.4%；PLA2R-IgG4-TRFIA在25.07 ng/ml时灵敏度/特异性为83.3%/76.9%，均优于ELISA（最佳临界值2.84 RU/ml，灵敏度/特异性50%/88%）。

4. 抗体动态监测揭示临床转化潜力

52例PMN患者随访数据显示，15.4%（8/52）在未治疗或免疫抑制治疗后出现抗体转阳（>20 RU/ml），其中3例基线期PLA2R-IgG4-TRFIA已呈阳性，提示TRFIA可早期识别潜在阳性患者。

结论与意义

本研究证实TRFIA在低抗PLA2R抗体滴度患者中具有优越的诊断价值，其高灵敏度与特异性为PMN的非侵入性诊断提供了新路径。通过优化临界值，TRFIA可减少约34%的肾活检需求，尤其适用于抗体低滴度或随访中抗体水平动态变化的患者。未来需开展多中心前瞻性研究验证TRFIA的长期预后评估价值，推动其成为PMN精准诊疗的重要工具。