Tyrphostin AG538 通过激活 TREM2 受体来抑制血小板激活和血栓形成

《Biochemical Pharmacology》：Tyrphostin AG538 inhibits platelet activation and thrombosis via TREM2 agonism

　　AG538通过激活TREM2受体抑制血小板活化和动脉血栓形成，同时不增加出血风险。机制涉及SHIP1-Akt通路抑制，该化合物在动物模型中显著降低肠系膜动脉血栓和肺栓塞，为新型抗血小板药物开发提供依据。

　　动脉血栓性疾病仍然是威胁人类健康的主要因素之一。这类疾病包括心脑血管疾病，如动脉粥样硬化血栓形成、心肌梗死和中风等，它们不仅导致严重的健康问题，还成为全球范围内发病率和死亡率最高的疾病之一。近年来，随着研究的深入，人们发现血小板在血栓形成过程中起着关键作用，其过度激活可能导致出血或缺血性并发症。因此，开发能够有效抑制血栓形成同时避免增加出血风险的新型抗血小板药物成为研究的重点。

目前，常用的抗血小板药物如P2Y12受体拮抗剂和COX-1抑制剂阿司匹林，虽然在临床上广泛应用，但它们在实际应用中仍面临诸多挑战。例如，部分患者对这些药物存在耐药性，导致治疗效果不佳，甚至出现反复血栓形成的情况。此外，某些强效抗血小板药物如普拉格雷和替卡格雷虽然能显著抑制血小板的激活和血栓形成，但其副作用之一是增加出血的风险，这在一定程度上限制了其在临床中的使用。因此，寻找一种既能有效抑制血栓形成，又不会显著增加出血风险的新型抗血小板药物，是当前医学研究的重要方向。

TREM2（触发受体表达于髓系细胞2）作为一种免疫球蛋白超家族成员，最初因其在阿尔茨海默病、代谢综合征和癌症中的作用而受到关注。然而，近期研究发现，TREM2在血小板中也具有重要的调控功能。TREM2通过与多种配体结合，如载脂蛋白E（ApoE）、β淀粉样蛋白（Aβ）、脂蛋白和磷脂，参与信号传导。在与适配蛋白DAP12或DAP10形成信号复合物后，TREM2通过其免疫受体酪氨酸激活基序（ITAM）激活下游信号通路，从而招募并磷酸化SHIP1（Src同源2结构域含肌醇5-磷酸酶1），进而对PI3K/Akt通路产生负调控作用。这一机制表明，TREM2不仅在免疫系统中起作用，还可能在血小板的生理功能中发挥关键作用。

我们的研究首次揭示了AG538作为一种小分子TREM2激动剂，在抑制血小板聚集和致密颗粒释放方面的潜力。通过分子对接、表面等离子共振（SPR）实验以及使用TREM2基因敲除小鼠的血小板实验，我们确认了AG538能够直接与TREM2结合，并通过激活TREM2的信号通路，有效抑制血小板的过度激活。此外，AG538在体外实验中表现出对多种血小板激活剂（如ADP、胶原蛋白和凝血酶）的显著抑制作用，同时在体内实验中，口服AG538能够有效抑制小鼠模型中的胶原蛋白诱导的血小板激活，并在肠系膜动脉微损伤模型中显著减少动脉血栓的形成。值得注意的是，尽管AG538的抗血栓效果略低于常见的抗血小板药物如氯吡格雷，但它并未增加出血风险，这一特性使其在临床应用中具有显著优势。

进一步研究发现，AG538不仅能够抑制血小板的聚集和致密颗粒释放，还能够影响血小板在纤维蛋白原和胶原蛋白表面的铺展，以及血栓的收缩过程。这些功能在血栓形成和血小板激活过程中起着至关重要的作用，因此AG538的这些作用机制为它作为抗血栓药物提供了理论基础。在肺栓塞模型中，AG538同样表现出一定的抗血栓效果，能够减轻血栓栓塞的病理表现，同时不影响正常的止血功能。这表明AG538可能在不干扰生理止血机制的前提下，有效预防血栓形成。

AG538是一种能够穿透细胞膜的、与IGF-1R（胰岛素样生长因子1受体）激酶竞争性结合的小分子化合物。它最初被用于治疗小鼠肿瘤，并在T细胞系中被鉴定为TREM2受体的激动剂。这一发现为AG538在抗血小板治疗中的应用提供了新的视角。通过多种实验方法，我们验证了AG538作为TREM2激动剂的作用，表明其能够有效抑制血小板的激活和血栓形成，同时保持良好的安全性。这些结果不仅为抗血小板药物的开发提供了新的思路，也为TREM2在血小板功能中的研究打开了新的篇章。

此外，我们还发现AG538对血小板的多种功能具有广泛的抑制作用。例如，在体外实验中，AG538能够显著减少ADP、胶原蛋白和凝血酶诱导的血小板聚集，同时抑制致密颗粒的释放。致密颗粒是血小板在激活过程中释放的重要细胞器，它们含有多种促凝物质，如ADP、血小板因子4（PF4）和血栓烷A2（TXA2）。这些物质在血栓形成过程中起着关键作用，因此抑制它们的释放可能有助于减少血栓的形成。同时，AG538还能够影响血小板在纤维蛋白原和胶原蛋白表面的铺展，这可能是由于TREM2的激活影响了血小板的黏附和信号传导过程。此外，AG538还能抑制血栓的收缩，这在血栓形成和血小板激活的病理过程中同样具有重要意义。

在体内实验中，AG538通过口服方式能够有效抑制小鼠模型中的胶原蛋白诱导的血小板激活，并在肠系膜动脉微损伤模型中显著减少动脉血栓的形成。这些结果表明，AG538不仅在体外具有良好的抗血小板活性，而且在体内实验中也表现出一定的抗血栓效果。同时，AG538在肺栓塞模型中也表现出一定的治疗潜力，能够减轻血栓栓塞的病理表现，而不会影响正常的止血功能。这一特性使其在临床应用中具有显著优势，因为许多现有抗血小板药物在抑制血栓形成的同时，会增加出血风险，从而限制了其使用范围。

在机制层面，AG538作为TREM2激动剂，通过激活TREM2的信号通路，抑制了下游的SHIP1-Akt信号传导。这一信号通路在血小板的激活过程中起着关键作用，SHIP1的激活能够负向调控PI3K/Akt通路，从而抑制血小板的过度激活。因此，AG538通过这一机制，能够在不干扰正常血小板功能的前提下，有效抑制血栓的形成。这种作用方式可能比传统的抗血小板药物更为安全，因为它们通常通过直接抑制血小板的激活途径，可能导致对正常血小板功能的干扰。

在抗血小板药物的开发过程中，TREM2的激活作用提供了一种新的策略。传统的抗血小板药物如阿司匹林和P2Y12受体拮抗剂，虽然在临床上广泛应用，但它们的作用机制往往涉及对血小板激活关键通路的直接抑制，这可能导致对正常止血功能的干扰。而AG538通过激活TREM2，间接调控血小板的激活过程，这种机制可能更加温和，从而降低出血风险。此外，TREM2在多种疾病中的作用表明，其在不同生理和病理条件下的调控能力可能具有更广泛的治疗潜力。

在临床转化方面，尽管抗体类药物在某些疾病治疗中表现出良好的效果，但其在抗血小板治疗中的应用仍面临诸多挑战。例如，抗体类药物可能难以穿透血小板膜，或者其作用时间较短，限制了其在临床中的广泛应用。而AG538作为一种小分子化合物，具有良好的细胞渗透性和可调节性，这使其在临床转化方面具有更大的潜力。此外，AG538的分子结构相对简单，可能更容易进行药物优化和开发，从而提高其临床应用的可行性。

综上所述，我们的研究结果表明，AG538作为一种小分子TREM2激动剂，在抑制血小板激活和血栓形成方面具有显著的潜力。其作用机制涉及对TREM2信号通路的激活，从而负向调控PI3K/Akt通路，抑制血小板的过度激活。这种作用方式不仅能够有效减少血栓的形成，还能够避免增加出血风险，因此AG538可能成为一种新型的抗血小板药物。此外，AG538在多种实验模型中的表现，表明其具有良好的安全性和有效性，为未来临床研究提供了坚实的基础。未来的研究可以进一步探讨AG538在不同疾病模型中的应用潜力，以及其在临床中的具体疗效和安全性。这些研究将有助于推动AG538在抗血小板治疗领域的应用，并为其他相关疾病的治疗提供新的思路。