NAAT技术对高致病性禽流感A(H5N1)检测效能的评估研究

《Clinical Chemistry》：A-268 Evaluation of NAAT Recovery of Highly Pathogenic Avian Influenza A (H5N1) Clade 2.3.4.4b from Novel Proficiency Samples

　　为应对高致病性禽流感A(H5N1) clade 2.3.4.4b变异株的检测挑战，研究人员通过能力验证样本评估了15种商业化NAAT检测方法的性能。研究发现现有方法能准确检出甲型流感，但对H5N1亚型的分型能力有限，凸显了诊断试剂需纳入新亚型检测以加强疫情监控的重要性。

　　

当高致病性禽流感A(H5N1)病毒于2021年首次出现在北美地区时，这场原本主要影响鸟类的疫情开始展现出更复杂的传播动态。这种病毒不仅感染野生鸟类和家禽，更令人担忧的是，它开始跨越物种屏障，感染野生陆地动物、海洋哺乳动物甚至家养动物。人类感染病例的报道陆续出现，部分源于接触受感染动物，但令人不安的是，某些病例的感染来源至今未知。尽管目前尚未发现有效的人际传播，但美国疾病控制与预防中心(CDC)已将H5N1病毒列为可能引发人类严重疾病的病原体。

在这一背景下，快速准确的实验室检测成为防控疫情的关键环节。然而，新出现的H5N1病毒分支（clade 2.3.4.4b）对现有诊断方法提出了严峻挑战。医疗工作者面临的核心问题是：当出现呼吸道症状的患者就诊时，现有的商业化检测方法能否可靠地识别出这种新型禽流感病毒？这一问题的答案直接关系到病例的早期发现、隔离措施的及时实施以及治疗方案的合理选择。

为回答这一关键问题，美国能力验证研究所(American Proficiency Institute)的研究团队开展了一项开创性研究，评估商业化核酸扩增检测(NAAT)方法对高致病性禽流感A(H5N1) clade 2.3.4.4b的检测能力。该研究结果发表于临床化学领域权威期刊《Clinical Chemistry》，为诊断试剂的性能评估提供了重要参考。

研究方法的核心是2025年组织的一项试点能力验证活动。研究团队通过Microbix Biosystems公司获得了两种液体稳定样本：PIA-01样本含有基于首例人感染H5N1病例公布数据构建的全基因组H5N1 cDNA模板，采用合成生物学和吉布森组装技术制备；PIA-02样本则作为对照含有H1N1病毒。这些样本被分发给74家实验室，这些实验室使用了15种不同的检测方法。参与者按照各设备制造商的说明处理样本，并将检测结果回报给研究团队。

研究结果揭示了当前商业化检测方法对H5N1病毒的识别能力。在甲型流感检测方面，参与实验室表现出色，能够准确识别样本中的流感病毒。这一结果令人鼓舞，表明现有检测平台在筛查流感感染方面具有可靠性能。然而，当涉及病毒亚型鉴定时，情况变得复杂。只有少数实验室的检测方法能够实现H1N1和H5N1亚型的准确区分，大多数方法在亚型鉴定层面存在明显局限。

这一差距凸显了当前诊断试剂的一个关键短板。虽然许多商业化检测方法包含了常见的季节性流感亚型（如A(H1)和A(H3)）的鉴定，但对于禽流感病毒等新型流感病毒的检测能力往往不足。这种局限性在应对新发传染病疫情时可能造成严重后果，包括延误疫情识别、影响防控决策。

研究的结论部分强调了亚型鉴定能力在传染病监测中的核心价值。在流感疫情暴发期间，仅仅确认甲型流感感染是远远不够的。特定病毒亚型的信息对于追踪传播链、评估疫情规模、制定针对性防控措施都至关重要。对于像H5N1这样具有大流行潜力的病毒，快速准确的亚型鉴定更是全球公共卫生防御体系的重要环节。

这项研究的创新之处在于首次系统评估了商业化NAAT检测对当前流行H5N1毒株的识别能力。通过使用标准化的能力验证样本和研究设计，确保了结果的可比性和可靠性。研究采用的全基因组cDNA模板基于真实人感染病例的序列数据，增强了评估的临床相关性。

值得注意的是，研究也指出了诊断试剂开发的动态性特点。随着病毒不断进化，检测方法需要相应更新以适应新出现的毒株。制造商面临的关键挑战是如何在保持检测稳定性的同时，及时纳入对新发病原体的检测能力。这一平衡对于维护全球公共卫生安全具有重要意义。

该研究的发现对多个利益相关方都具有启示意义。对于诊断试剂制造商，研究结果指出了产品改进的方向：需要扩大检测范围以覆盖新发流感病毒亚型。对于临床实验室，研究强调了参与能力验证活动的重要性，以及了解所用检测方法局限性的必要性。对于公共卫生机构，研究结果支持了加强实验室监测网络建设的迫切性，特别是在人畜共患传染病防控领域。

展望未来，随着流感病毒的持续进化，对快速、全面检测方法的需求将日益增长。这项研究为诊断方法的评估建立了重要基准，也为应对未来新发传染病威胁提供了方法论参考。在全球化背景下，加强实验室检测能力建设不仅是技术问题，更是全球公共卫生安全体系的重要组成部分。