15分钟快速分子诊断：DASH? SARS-CoV-2与流感A/B检测试剂在床旁的应用与评估

《Clinical Chemistry》：A-416 Clinical and Analytical Evaluation of the 15-minute, FDA-Cleared, CLIA-Waived, DASH? SARS-CoV-2 and Flu A/B Test Performed on the Point-of-Care DASH? Rapid PCR System

　　本研究针对呼吸道感染病原体（SARS-CoV-2、Flu A/B）在床旁（POC）快速精准诊断的需求，开发了基于RT-PCR的DASH?快速检测系统。临床多中心验证显示，其对SARS-CoV-2、Flu A和Flu B的阳性符合率（PPA）分别为95.2%、96.6%和97.3%，阴性符合率（NPA）均高于99%，分析性能与现有FDA认可方法相当。该15分钟CLIA豁免系统为呼吸道感染的即时分型提供了简单、快速、准确的解决方案。

　　

呼吸道感染是全球范围内常见的健康问题，其中由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）以及流感病毒（Influenza Virus）A型和B型引起的疾病具有高度传染性，且临床症状相似，给临床鉴别诊断和及时治疗带来了巨大挑战。传统的实验室分子检测方法，如逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），虽然具有高灵敏度和特异性，但通常需要数小时甚至更长时间才能获得结果，并且对实验室环境和操作人员有较高要求，难以在基层医疗机构或床旁（Point-of-Care, POC）场景下快速应用。因此，开发一种能够在极短时间内提供准确结果、操作简便且适用于床旁的快速分子诊断工具，对于实现呼吸道感染的早期诊断、有效隔离和针对性治疗具有至关重要的意义。

为了应对这一挑战，研究人员开展了一项旨在评估DASH? SARS-CoV-2与流感A/B检测试剂（DASH? SARS-CoV-2& Flu A/B Test）临床与分析性能的研究。该检测是一种经美国食品药品监督管理局（FDA）批准、临床实验室改进修正案（CLIA）豁免的快速分子诊断方法，可在专用的DASH?快速PCR仪器上运行，从样本到结果的总周转时间仅为15分钟。本研究旨在验证该检测在真实世界多中心研究中的表现，并将其与已获FDA批准的RT-PCR对照方法进行比较，以确定其是否适合在床旁环境中推广使用。相关研究成果发表在《Clinical Chemistry》期刊上。

研究人员为开展此项评估，主要应用了以下几项关键技术方法：首先，研究设计为多中心临床性能研究，于2024年1月至3月在美国境内七个地理分布各异且具有CLIA豁免资质的检测点进行，招募对象为有呼吸道感染症状的个体，共纳入817名合格受试者，最终分别有795份（SARS-CoV-2）和792份（Flu A/B）前鼻拭子（Anterior Nasal Swab）标本用于性能计算。其次，采用对比验证的研究方法，以前鼻拭子标本同时进行DASH?检测和已获FDA批准的RT-PCR对照检测，并计算阳性符合率（Positive Percent Agreement, PPA）和阴性符合率（Negative Percent Agreement, NPA）以评估临床敏感性和特异性。对于不一致结果，使用第三种高灵敏度的FDA批准检测进行仲裁。最后，分析性能评估严格遵循FDA指南和临床实验室标准协会（CLSI）指南，并在三个CLIA豁免站点进行了重现性评价。

临床性能

通过大规模临床标本检测，研究人员系统评估了DASH?检测对三种病原体的诊断效能。结果表明，该检测具有优异的临床敏感性和特异性。

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  SARS-CoV-2检测性能：针对SARS-CoV-2，DASH?检测的阳性符合率（PPA）为95.2%（95%置信区间[CI]: 90.9%-97.6%），即160个经对照方法确认的阳性标本中，有160个被DASH?检测为阳性。阴性符合率（NPA）为99.5%（95% CI: 98.5%-99.8%），即624个阴性标本中，有624个被正确判定为阴性。这一结果证实了该检测对SARS-CoV-2感染的高效识别能力。
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  Flu A检测性能：对于流感病毒A型，DASH?检测的PPA达到96.6%（95% CI: 92.8%-98.5%），即在53例阳性标本中检测出53例阳性。NPA为98.1%（95% CI: 96.8%-98.9%），在739例阴性标本中正确识别了725例。这表明该检测能可靠地区分Flu A感染与其他呼吸道病原体感染。
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  Flu B检测性能：对于流感病毒B型，DASH?检测的PPA为97.3%（95% CI: 85.6%-99.5%），在37例阳性标本中检测出36例。NPA高达99.2%（95% CI: 98.3%-99.6%），在755例阴性标本中正确识别了749例。这进一步支持了其在流感病毒分型诊断中的准确性。

分析性能与重现性

除临床标本验证外，研究还按照严格标准评估了该检测的分析性能。分析灵敏度（检测下限）、分析特异性（包括交叉反应性）等指标均符合要求。重现性评估在三个独立的CLIA豁免站点进行，结果显示不同操作员、不同仪器和不同日期之间的检测结果具有高度一致性，证明了该检测方法在床旁使用环境下的稳定性和可靠性。

综上所述，本研究通过对DASH? SARS-CoV-2与流感A/B检测试剂进行的全面临床与分析评估，得出了明确的结论：该检测是一种快速、稳健的分子诊断方法，非常适合在床旁使用。其总检测时间仅为15分钟，极大地缩短了诊断等待时间。临床性能数据显示，其对SARS-CoV-2、Flu A和Flu B的检测性能（PPA和NPA）与现有已获FDA批准的传统分子诊断方法基本等效。分析性能评估，特别是多站点的重现性研究，证实了其在CLIA豁免环境下操作的简便性和结果的可靠性。该研究的成功意味着，DASH?快速PCR系统能够将传统分子诊断的准确性优势与床旁检测的即时性、便捷性相结合，为呼吸道感染患者提供简单、经济、快速且准确的诊断解决方案，有望在诊所、药房、急诊科等多样化的医疗场景中发挥重要作用，从而促进感染的早期管理、合理用药和公共卫生防控。