基于单表位夹心技术（SES-BNPTM）的B型利钠肽（BNP）检测新方法的创新设计与评价：提升样本稳定性与检测性能

《Clinical Chemistry》：A-030 Innovative Design and Evaluation of a BNP Assay with Enhanced Sample Stability

　　本研究针对传统B型利钠肽（BNP）检测中因蛋白酶降解导致的样本稳定性差这一临床难题，开发了基于单表位夹心技术（SES-BNPTM）的新型BNP检测方法。研究证实，该方法显著提升了血浆样本在不同温度条件下的稳定性（室温下从4-8小时延长至8小时，2-8°C下从12小时延长至24小时），并展现出优异的分析性能（LoQ低至3.00 pg/mL，总不精密度<5%），为心力衰竭（HF）的实验室诊断提供了更可靠的工具。

　　

在心血管疾病的诊断与管理中，B型利钠肽（B-type Natriuretic Peptide, BNP）及其相关肽N末端B型利钠肽原（N-terminal-proBNP, NT-proBNP）犹如一对“黄金搭档”，是评估心脏功能、诊断急慢性心力衰竭（Heart Failure, HF）以及进行风险分层和疗效监测不可或缺的生物标志物。它们由心脏细胞在受到牵拉刺激时释放，能灵敏地反映心脏所承受的压力。尽管BNP和NT-proBNP在生理学上价值相似，但在临床和实验室应用中却各有千秋。一个突出的区别在于，BNP受肾功能影响较小，这本是其一大优势，然而，它有一个致命的弱点——在血液中极不稳定，容易被蛋白酶迅速降解，导致其免疫活性丧失，这给临床检测的准确性和样本处理的时效性带来了严峻挑战。传统的BNP免疫检测方法通常采用双抗体夹心法，即使用两种针对BNP分子上不同表位（epitope）的抗体。如果这两个表位在分子上的空间位置相距较远，就会增加整个BNP分子在血液中被蛋白酶“切割”降解的风险，如同一个目标变大了，更容易被攻击。因此，如何设计一种能够规避蛋白酶降解风险的检测策略，开发出具有更高样本稳定性的BNP检测方法，成为实验室实践中的一个重要课题。

为了解决这一难题，来自迈瑞医疗（Mindray）的张毅（Yi Zhang）研究团队在《Clinical Chemistry》上发表了一项创新性研究，题为“Innovative Design and Evaluation of a BNP Assay with Enhanced Sample Stability”。研究人员独辟蹊径，开发了一种基于单表位夹心技术（SES-BNP^TM, Single Epitope Sandwich）的新型BNP检测方法。该技术的核心思路是精心挑选抗体对，使其针对的表位不易发生酶解，从而从设计源头提升BNP分子的检测稳定性。

为验证这一新方法的有效性，研究团队开展了一系列严谨的评价工作。首先，他们评估了BNP分子在血液基质和合成基质中的稳定性。其次，他们测试了不同患者血浆样本在不同温度条件下的稳定性。最后，他们对新BNP检测法的分析性能进行了全面评估，包括检测灵敏度（空白限LoB、检出限LoD、定量限LoQ）、特异性、精密度等关键指标。

主要技术方法概述

本研究主要采用了基于单表位夹心原理（SES-BNP^TM）的免疫测定技术。研究评估了BNP在血液基质和合成基质中的稳定性，并利用不同来源的患者血浆样本，系统考察了样本在室温及2-8°C冷藏条件下的稳定性变化。同时，研究按照规范程序对新建立检测方法的分析性能进行了验证，内容包括确定LoB、LoD、LoQ，评估与潜在干扰物质的交叉反应，以及进行精密度评价等。

研究结果

BNP分子稳定性提升

研究结果显示，采用新方法后，不同形式的BNP分子在室温下8小时内或在2-8°C下24小时内能保持稳定。与市售的传统BNP检测方法相比，新方法的样本稳定性得到了显著提升。对于不同患者的血浆样本，其在室温下的稳定时间从原来的4-8小时延长至8小时；在2-8°C冷藏条件下的稳定时间则从12小时延长至24小时。这表明SES-BNP^TM技术有效地保护了BNP分子免受降解，为临床样本的采集、运输和检测赢得了更宽松的时间窗口。

优异的分析性能

新型BNP检测法展现了卓越的分析灵敏度，其空白限（LoB）为1.00 pg/mL，检出限（LoD）为2.00 pg/mL，定量限（LoQ）低至3.00 pg/mL。在接近非心力衰竭人群的判定阈值（100 ng/L）附近，该检测法的总不精密度（Total imprecision）小于5%，表明其具有很高的检测重复性和可靠性。此外，研究未观察到内源性干扰物存在交叉反应或干扰，证明了该方法良好的特异性。

研究结论与意义

本研究表明，通过应用单表位夹心技术（SES-BNP^TM），成功开发出一种新型BNP检测方法，该方法显著改善了BNP检测中的样本稳定性问题。无论是在血浆环境还是合成缓冲液体系中，BNP分子的稳定性均得到提高，这将使实验室操作更加便捷。经过全面评估，该新型BNP检测法被证实具有高灵敏度、高特异性和高精密度。

这项研究的成功，对于心力衰竭的实验室诊断具有重要的实践意义。提升的样本稳定性降低了对样本处理及时效性的苛刻要求，减少了因样本降解导致错误结果的风险，尤其有利于基层医院或样本需要长途运输的场景。高灵敏度和高精密的检测性能则为临床医生提供了更准确、可靠的BNP检测数据，有助于更精准地诊断心力衰竭、评估病情和指导治疗。该研究为解决BNP检测的长期痛点提供了一个创新且有效的技术方案，展现了良好的临床应用前景。