激活转录因子3在高渗应激诱导的人类角膜上皮细胞损伤中的作用

《Cornea》：Role of Activating Transcription Factor 3 in Hyperosmotic Stress–Induced Human Corneal Epithelial Cell Damage

　　本研究探讨激活转录因子3（ATF3）在渗透压升高（HS）诱导的人角膜上皮细胞（HCE）损伤中的作用，发现HS通过激活ATF3-NEAT1 HuR-TLR4通路促进细胞凋亡和炎症反应，为干眼病治疗提供新靶点。

　　

摘要

目的：

干眼症伴随的眼表炎症会导致角膜上皮细胞损伤。本研究旨在探讨激活转录因子3（ATF3）在高渗应激（HS）诱导的人类角膜上皮（HCE）细胞损伤中的作用，并寻找治疗干眼症的新靶点。

方法：

将HCE细胞分别用等渗或高渗（312和500 mOsM）培养基培养24小时，并加入94 mM的NaCl以创造高渗环境。转染siRNA-ATF3后，通过qRT-PCR和Western blot检测ATF3、LncRNA核富集丰富转录本1（NEAT1）、人类抗原R（HuR）和Toll样受体4（TLR4）的表达。利用CCK-8检测细胞增殖情况，同时测量LDH、ROS、TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。通过流式细胞术检测细胞凋亡。分析ATF3在NEAT1启动子上的富集情况，以及ATF3与NEAT1和TLR4的结合情况。还测量了TLR4 mRNA的稳定性。通过过表达NEAT1或TLR4并结合ATF3敲低来验证这一机制。

结果：

高渗应激导致HCE细胞释放LDH、产生ROS、发生细胞凋亡并引发炎症，同时上调ATF3的表达。敲低ATF3可减轻上述细胞损伤。ATF3通过促进NEAT1的表达来增强TLR4 mRNA的稳定性。然而，过表达NEAT1或TLR4会部分抵消ATF3敲低对HS诱导的HCE细胞损伤的保护作用。

结论：

ATF3通过上调NEAT1的表达来增加TLR4的表达，从而促进HS诱导的HCE细胞损伤。