山羊副结核病疫苗接种时机对Map实验感染后免疫应答与病理进程的调控作用

　　本刊推荐：本研究通过实验模型探讨山羊副结核病（Paratuberculosis）灭活疫苗在不同时间点（感染前30天与感染后150天）接种对Map感染进程的调控作用。结果表明，疫苗接种虽不能完全阻止组织定植，但显著降低临床病变发生率、减少组织活菌量（通过培养与PCR验证）并抑制弥漫性病变进展。感染前接种组（VI）在干扰素-γ（IFN-γ）分泌、抗体反应及肉芽肿数量控制方面表现最优，而感染后接种（IV）组呈现反应异质性，未明确证实治疗性效果。该研究为反刍动物副结核病防控策略提供了关键实验依据。

　　

引言

副结核病（Paratuberculosis），又称约翰氏病（Johne’s disease），是由禽分枝杆菌副结核亚种（Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis, Map）引起的慢性传染性疾病，对全球家养及野生反刍动物构成严重威胁。该病导致畜牧业重大经济损失，且其与人类克罗恩病的潜在关联持续引发学术关注。Map感染多发生于幼畜期，主要通过粪-口途径传播，但临床症状往往在成年期才显现，表现为进行性体重下降、腹泻及弥漫性肉芽肿性肠炎。值得注意的是，大部分感染动物终生处于亚临床状态，仅表现为肠道淋巴组织中的局灶性肉芽肿病变。免疫应答在疾病进展中扮演关键角色，而疫苗接种被视为最具成本效益的防控手段，尤其对小型反刍动物而言。

材料与方法

本研究选用35头1.5月龄穆尔西亚-格拉纳达品种山羊羔，随机分为6组：VI组（感染前30天接种）、VNI组（接种不感染）、NVI组（感染不接种）、IV组（感染后150天接种）、NIV组（未感染但接种）及NVNI组（阴性对照）。所有感染组通过口服途径接种K-10 Map菌株，总剂量为1.2×10¹⁰ cfu。疫苗接种采用市售灭活疫苗Silirum^?（含316F Map菌株）。在感染后120天及330天分别实施屠宰，系统评估临床表现、外周与局部免疫应答、组织病理学变化及Map定植情况。

外周免疫应答分析显示，疫苗接种显著提升干扰素-γ（IFN-γ）释放水平，尤其在感染前接种组（VI）中，其应答强度持续至180天。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测到疫苗接种组抗体水平显著升高，且感染前接种组抗体持续时间长达7个月。比较皮内变态反应（SICCT）证实，疫苗接种组对禽结核菌素（avian PPD）的反应显著强于牛结核菌素（bovine PPD），但按标准判定无结核病阳性个体。流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群发现γδ T细胞为主导种群，但组间无显著差异。

病理学研究通过组织学检查与肉芽肿计数揭示，感染不接种组（NVI）病变最为严重，表现为多灶性甚至弥漫性肉芽肿，而感染前接种组（VI）仅见局灶性病变，且伴随明显纤维化。值得注意的是，感染后接种组（IV）中个别动物出现弥漫性多菌型病变，伴大量抗酸杆菌（AFB）及坏死灶。肉芽肿数量统计表明，NVI组在330天时显著增加，而VI组则减少。

微生物学研究中，细菌培养仅从NVI组一例粪便及IV组一例组织样本中分离到Map，而巢式PCR（nested PCR）检测灵敏度更高，在感染组多个组织样本中检出Map DNA，尤其以空肠派伊尔结（Peyer’s patches）及淋巴结阳性率最高。

局部免疫应答分析显示，疫苗接种对肠道淋巴组织中的IFN-γ分泌及淋巴细胞亚群分布无显著影响，但感染本身可激活淋巴结局部免疫反应。

讨论

本研究证实，副结核病疫苗接种——尤其是感染前实施——可有效调控疾病进程，限制病变向严重形式发展，并减少细菌扩散。感染前接种组（VI）呈现优异的免疫保护表型，包括高水平IFN-γ、抗体反应及病变限制，而感染后接种（IV）虽部分动物表现良好反应，但整体异质性高，未明确支持治疗性效应。疫苗接种虽不阻止Map定植，但显著降低活菌负荷及传播风险。此外，SICCT作为鉴别诊断工具，在疫苗接种背景下仍可有效排除结核病感染。

结论

综上所述，疫苗接种对副结核病的病理进程具有重要调节作用，尤其感染前接种可有效限制病变进展及细菌扩散。感染后接种虽具潜在应用价值，但应答变异性高，需进一步研究优化策略。本研究为反刍动物Map防控提供了扎实的实验依据，并强调疫苗接种在综合管理中的核心地位。