基于液体活检与NGS的弥漫性高级别胶质瘤分子分型：cfDNA与FFPE样本突变一致性研究及其临床转化前景

　　本研究针对弥漫性高级别胶质瘤侵袭性强、预后差的问题，通过下一代测序技术（NGS）对30例患者的配对cfDNA与FFPE样本进行分子分析。结果显示cfDNA检测与组织样本达到100%突变一致性，成功捕获ATRX、TERT、TP53等关键变异，证实液体活检可作为无创诊断与动态监测的有效工具，为胶质瘤精准诊疗提供新策略。

　　

弥漫性高级别胶质瘤（High-Grade Gliomas, HGGs）作为最具侵袭性的脑肿瘤类型，长期以来困扰着神经肿瘤领域。其高复发率和极差的预后构成了临床治疗的重大挑战。传统诊断依赖组织活检，但颅内肿瘤取样具有高风险性，且难以实现动态监测。随着分子病理学的发展，下一代测序（Next-Generation Sequencing, NGS）技术的出现为揭示肿瘤分子特征提供了强大工具，而液体活检——尤其是基于血液中细胞游离DNA（cell-free DNA, cfDNA）的分析——正逐步成为替代组织活检的无创手段。

尽管液体活检在肺癌、结直肠癌等实体瘤中已展现出良好的应用前景，但在脑肿瘤中仍面临挑战，主要原因包括血脑屏障的限制导致cfDNA释放量较低、检测灵敏度要求极高。因此，评估cfDNA在脑胶质瘤分子分型中的可行性、验证其与金标准福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织样本的一致性，成为推动该技术临床转化的关键问题。

在此背景下，由S.Singh、S. Bhardwaj等研究人员组成的团队开展了一项创新性研究，旨在系统评估基于NGS的cfDNA分析在弥漫性胶质瘤诊断与监测中的临床效用。该研究发表于神经肿瘤学权威期刊《Neuro-Oncology》，为液体活检在神经肿瘤领域的应用提供了重要证据。

研究人员采用靶向测序技术，对30例高级别胶质瘤患者的配对样本——血浆来源cfDNA和FFPE肿瘤组织——进行深度测序。检测面板涵盖118个中枢神经系统（CNS）肿瘤相关基因，使用QIAGEN定制面板进行文库构建，并在NovaSeq 6000平台上完成测序。FFPE样本测序深度达4000x，cfDNA达7000x，灵敏度设定为5%的等位基因频率。通过GRCh37/hg19参考基因组进行变异注释，并系统比较两类样本的分子一致性。

研究结果揭示了一系列重要的发现：

在“分子变异谱系”方面，NGS成功识别出多种类型的体细胞突变，包括单核苷酸变异（SNVs）、插入缺失突变（Indels）和结构变异。所有30例cfDNA样本均至少检测到一种可识别的体细胞突变，且与FFPE样本的突变谱高度一致。

关于“cfDNA与组织样本一致性”，研究观察到cfDNA检测与FFPE样本在关键驱动基因突变上达到100%的一致性。这些基因包括TP53（肿瘤抑制基因）、TERT（端粒酶逆转录酶启动子区）、SMO（Smoothened受体）、PDGFRA（血小板衍生生长因子受体α）、ACVR1（活化素受体1型）、MSH3（DNA错配修复蛋白）、EGFR（表皮生长因子受体）和PTEN（磷酸酶与张力蛋白同源物）。

此外，研究人员还强调了“液体活检的临床价值”：cfDNA分析不仅能够无创地获取与组织样本相同的分子信息，还可实现肿瘤基因型的动态监测，为复发评估、靶向治疗选择和疗效预测提供实时依据。

研究表明，基于液体活检的NGS技术可用于弥漫性高级别胶质瘤的精确分子分型，且cfDNA与传统FFPE组织样本在关键突变检测中表现出完全一致性。这一发现具有多重临床意义：首先，它提供了一种非侵入性的替代手段，尤其适用于无法进行重复手术或组织取样高风险的患者；其次，cfDNA分析能够反映肿瘤的空间与时间异质性，克服了传统活检仅代表局部区域的局限性；最后，该技术为实施个体化治疗策略、实时监测疾病演进及早期发现耐药机制提供了可行路径。

尽管该研究样本量有限，但其结果显著支持液体活检在神经肿瘤领域的广泛应用前景。未来研究可进一步扩大队列规模、优化检测技术以提高灵敏度，并探索cfDNA与其他生物标志物（如循环肿瘤细胞、外泌体）的联合应用价值。综上所述，这项研究不仅验证了液体活检在脑胶质瘤管理中的可靠性，也推动了精准神经肿瘤学向无创、动态、实时监测的新阶段迈进。