Bepirovirsen通过免疫调节机制诱导慢性HBV感染者感染肝细胞清除：来自B-Together研究的机制探索

　　【编辑推荐】慢性HBV感染临床负担沉重，功能性治愈亟待突破。本研究通过多组学分析揭示反义寡核苷酸bepirovirsen可通过激活免疫系统（TNFα、IL-10/12上调）促进感染肝细胞清除（ALT/AIFM1/KRT18升高），其诱导的ALT升高与HBsAg下降同步，可能是治疗响应的标志。该研究为HBV功能性治愈提供了新的机制见解。

　　

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球重要的公共卫生问题，患者面临肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌的风险。虽然现有核苷（酸）类似物（NA）能有效抑制病毒复制，但难以实现功能性治愈（即停药后24周HBsAg和HBV DNA持续低于检测下限）。Bepirovirsen作为一种研究性反义寡核苷酸（ASO），通过靶向所有HBV RNA直接发挥抗病毒作用。值得注意的是，与配体偶联的siRNA不同，bepirovirsen未进行GalNAc偶联，可能被非实质肝细胞摄取，从而刺激免疫系统。

IIb期B-Together研究先前发现，bepirovirsen联合聚乙二醇干扰素α-2a（Peg-IFN）治疗可使9%-15%患者获得功能性治愈。研究中观察到部分患者出现一过性丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高，且多伴随HBsAg下降，提示ALT升高可能与感染肝细胞清除这一治疗效应相关。为深入探究bepirovirsen的免疫调节机制及其与病毒学应答的关系，研究人员开展了这项事后多组学分析。

研究采用多技术平台整合分析：对82例接受bepirovirsen治疗患者的纵向血清样本进行蛋白质组学分析（检测细胞因子等可溶性生物标志物）；全血转录组学分析免疫细胞mRNA表达；外周血单核细胞（PBMC）免疫表型分析评估免疫细胞亚群频率和活化状态。通过差异表达分析和通路富集分析，探究治疗过程中免疫应答和肝细胞死亡相关标志物的动态变化。

免疫激活与细胞增殖的早期证据

研究发现，无论治疗组别或应答状态，bepirovirsen治疗3周时血清中具有免疫效应子和凋亡功能的蛋白表达即显著升高。肿瘤坏死因子α（TNFα）、白细胞介素10（IL-10）和IL-12等关键免疫调节因子均呈现上升趋势，其中TNFα和IL-12可促进T细胞增殖和存活，IL-10则推动B细胞向浆细胞分化。至治疗5周时，全血转录组分析显示与细胞增殖（CCNB2、H2BC14、TYMS）和B细胞应答（MS4A1/CD20、IL-7、PLEKHG1）相关的转录本显著增加。流式细胞术进一步证实细胞毒性CD8⁺ T细胞（CD38⁺HLA-DR⁺）和B细胞（Ki67⁺）的增殖和活化趋势。这些发现表明bepirovirsen能够早期激活先天和适应性免疫应答。

肝细胞死亡与病毒学应答的关联

治疗8周时，应答者血清中凋亡特异性标志物（AIFM1、KRT18、HTRA2）和肝脏特异性蛋白（ADH4、AGXT、CA5A）的表达显著高于无应答者，且与ALT水平高度正相关（如AIFM1与ALT相关系数达0.84）。这些蛋白中20/25被鉴定为肝脏来源，而造血干细胞和内皮细胞标志物（CD34、THY-1、PECAM1）未见显著变化，支持肝细胞特异性死亡的发生。值得注意的是，这些变化在无效应答者（null responders）中几乎不存在。

感染肝细胞清除的间接证据

对个体患者病毒动力学分析发现，应答者中ALT升高常伴随一过性HBV DNA上升和HBsAg下降，提示感染肝细胞死亡导致病毒颗粒释放。而在无效应答者中，ALT、HBV DNA和HBsAg均无显著变化。这种同步变化模式与既往Peg-IFN研究报道一致，进一步支持感染肝细胞清除是bepirovirsen治疗的重要作用机制。

研究结论与意义

本研究通过多组学分析首次揭示bepirovirsen可通过免疫调节作用促进感染肝细胞清除。其机制包括：早期激活先天和适应性免疫（细胞因子产生、免疫细胞增殖）；诱导肝细胞凋亡（凋亡和肝脏特异性蛋白释放）；选择性清除感染细胞（ALT升高伴随HBV DNA一过性上升和HBsAg下降）。这些发现为bepirovirsen治疗过程中观察到的ALT升高提供了机制解释，表明其可能是治疗响应的生物标志物而非药物性肝损伤。

研究存在一定局限性：样本量较小且缺乏安慰剂对照（部分通过B-Clear研究数据弥补）；缺乏肝脏样本和HBV特异性T/B细胞数据；未捕获早期先天免疫激活过程。然而，这些发现为bepirovirsen的免疫调节机制提供了重要证据，支持其在慢性HBV治疗中的开发价值。目前bepirovirsen正在进行III期B-Well研究（NCT05630820和NCT05630807），有望为HBV功能性治愈提供新的治疗策略。

该研究由GSK团队Shilpy Joshi、Johannes M. Freudenberg等完成，发表于《Hepatology International》期刊，为慢性HBV感染的免疫治疗策略提供了新的理论基础和临床见解。