综述：肾细胞癌肿瘤微环境中三级淋巴结构的作用及免疫治疗反应

　　本综述深入探讨了三级淋巴结构（TLS）在肾细胞癌（RCC）肿瘤微环境（TME）中的关键作用及其对免疫治疗（尤其是免疫检查点抑制剂ICIs）疗效的影响。文章系统阐述了TLS的形成机制（如CXCL13等关键趋化因子的驱动）、异质性（成熟mTLS与不成熟imTLS的功能差异）及其作为预测生物标志物的潜力，并展望了通过靶向TLS（如联合抗血管生成治疗或细胞因子调控）来改善RCC免疫治疗策略的未来方向。

　　

三级淋巴结构的形成与功能

三级淋巴结构（TLS）是在慢性炎症或肿瘤等病理状态下于非淋巴组织中形成的 ectopic 淋巴样结构。其形成过程，即 ectopic lymphogenesis，由特定的炎症信号驱动，关键趋化因子包括CXCL13、CCL19和CCL21，它们招募淋巴细胞并与成纤维细胞、内皮细胞等相互作用，最终形成具有B细胞区、T细胞区、高内皮微静脉（HEVs）和抗原呈递细胞的结构化淋巴样聚集体。高内皮微静脉（HEVs）是TLS的标志性特征，通过表达地址素和趋化因子持续招募淋巴细胞。树突状细胞（DCs）定位于HEVs和成纤维细胞网状细胞（FRCs）网络附近，增强抗原呈递并协调免疫细胞的空间相互作用。TLS的发育和成熟还受到淋巴毒素αβ（lymphotoxin αβ）和肿瘤坏死因子（TNF）通路的调控。成熟TLS（mTLS）从最初的免疫细胞聚集进展为具有生发中心的复杂结构，B细胞和T细胞在此激活，通过持续的抗原呈递和免疫刺激增强局部和全身抗肿瘤反应。

TLS的免疫细胞组成与功能

TLS主要由B细胞和T细胞组成。B细胞聚集在生发中心样区域，经历亲和力成熟和抗体分泌，而相邻区域的T细胞参与抗原特异性免疫反应。TLS内的树突状细胞（DCs）捕获并呈递抗原以激活T细胞，滤泡辅助T细胞（Tfh）在B细胞成熟和抗体产生中起关键作用。这种免疫细胞的多样性使TLS能够作为肿瘤微环境（TME）中强大的免疫调节枢纽。

位于肿瘤附近的TLS提高了抗原呈递的效率。TLS的形成始于促炎趋化因子的释放，特别是CXCL13、CCL19和CCL21，它们将B细胞、初始和中央记忆T细胞以及DCs招募到肿瘤部位。这些免疫细胞与FRCs和内皮细胞相互作用，组织成不同的淋巴样聚集体。HEVs形成以维持持续的淋巴细胞流入，而滤泡树突状细胞（FDCs）和Tfh细胞进一步支持B细胞活化、亲和力成熟和生发中心发育。TLS通常按其成熟度分类。不成熟TLS（imTLS）通常表现为缺乏明确结构和生发中心的松散聚集体，抗原呈递有限，免疫功能弱。相反，成熟TLS（mTLS）的特征是清晰的B细胞滤泡、T细胞区、生发中心样结构和有效的抗原呈递细胞网络，能够强力激活细胞毒性T细胞和B细胞。

TLS在肿瘤中的存在与异质性

TLS的形成和功能在不同肿瘤类型间差异显著，受促炎信号、免疫细胞招募和对免疫治疗反应性的影响。在免疫原性肿瘤中，如非小细胞肺癌（NSCLC）和黑色素瘤，TLS形成频繁且与改善的预后和ICI疗效相关。在这里，TLS作为抗原呈递和免疫激活的平台，增强T和B细胞反应。三阴性乳腺癌（TNBC）同样显示TLS存在可改善结局，这些结构支持免疫细胞浸润和记忆形成。

相反，在低免疫原性或“冷”肿瘤中，如胰腺癌和肝细胞癌，TLS罕见且通常因高度免疫抑制环境（稀疏的免疫浸润和高水平的抑制性细胞因子如TGF-β、IL-10）而功能受损。然而，在一些冷肿瘤中，mTLS的形成仍能增强抗肿瘤免疫力并与更好的临床结局相关。

值得注意的是，除了肿瘤类型和免疫背景外，TLS的空间定位也已成为其预后价值的关键决定因素。最近在ccRCC中的研究表明，肿瘤近端TLS，特别是那些具有成熟生发中心样结构的TLS，与改善的无进展生存期和总生存期显著相关。相比之下，肿瘤远端TLS更可能是不成熟的，并且通常伴有更高水平的调节性T细胞（Tregs）和PD-L1⁺⁺肿瘤相关巨噬细胞，与免疫抑制微环境和较差的临床结局相关。这些发现强调了TLS空间分布在预测免疫治疗疗效和患者预后方面的重要性。

RCC免疫微环境中的TLS

RCC的特征性免疫微环境

肾细胞癌（RCC）表现出独特的肿瘤微环境（TME），以显著的免疫抑制、代谢重编程和缺氧为特征，这些共同导致免疫逃逸并使免疫治疗复杂化。调节性T细胞（Tregs）通过细胞因子如TGF-β和IL-10抑制效应T细胞功能，而髓系来源的抑制细胞（MDSCs）产生活性氧和 nitric oxide，直接抑制效应T细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）。此外，RCC的代谢需求和缺氧条件激活缺氧诱导因子（HIF-1α和HIF-2α），促进血管生成并进一步抑制效应T细胞活性。RCC的高PD-L1表达促进免疫逃逸，使其成为免疫检查点抑制剂（ICIs）的靶点，ICIs在晚期病例中已显示出显著疗效。

RCC的免疫微环境不仅以其免疫抑制性质为特征，还具有显著的空间异质性。在此背景下，TLS作为局部免疫生态位，可能部分抵消免疫抑制机制。空间转录组学和单细胞分析表明，在TLS阳性的RCC肿瘤中，B细胞完全成熟为产生IgG和IgA的浆细胞，并伴有体细胞高频突变、克隆扩增和局部抗体分泌。这些抗体可以介导直接的肿瘤细胞杀伤，正如在凋亡肿瘤细胞上观察到的IgG染色所证明的那样，并且它们的产生与对ICIs的持久反应呈正相关。

此外，具有强大生发中心样活性的高密度TLS与接受抗PD-1治疗患者的延长无进展生存期相关。相反，组织驻留耗竭CD8⁺⁺ T细胞（例如ZNF683⁺⁺SLAMF7⁺⁺）的富集与较差的临床结局相关，强调了RCC微环境内的免疫抑制力量。值得注意的是，与大多数实体瘤中CD8⁺⁺肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）浸润预测良好预后不同，RCC表现出独特的免疫学悖论，即高CD8⁺⁺ TIL含量通常与T细胞功能障碍和更差的结局相关。这种复杂性表明，TLS在RCC中的预后和治疗价值是情境依赖的，并可能受到共浸润免疫群体的相对丰度和功能状态的影响。因此，一个TLS丰富且低耗竭的免疫环境可能代表ICI反应性的最佳景观。

TLS在RCC免疫微环境中的存在与作用

最近的研究揭示了TLS在RCC不同患者亚组和组织学亚型中的形成、空间分布和临床意义的显著异质性。在最常见的亚型——透明细胞RCC（ccRCC）中，多个大规模、多中心队列和空间转录组学研究已证实，成熟的瘤内TLS与改善的生存结局和对PD-1/PD-L1免疫检查点阻断的更强反应相关。这些TLS富含表达IgA/IgG的功能性浆细胞，表明它们在支持活跃的抗肿瘤免疫微环境中的作用。相比之下，ccRCC中的不成熟或瘤周TLS经常伴有调节性T细胞（Tregs）和PD-L1阳性肿瘤相关巨噬细胞的浸润，表明其具有免疫抑制表型，并与较差的临床结局相关。

特别值得注意的是，TLS在不同RCC亚型间的异质性日益明显。例如，在SMARCB1缺陷的髓样RCC（一种罕见且侵袭性的亚型）中，TLS也显示出预后价值。一项小规模队列研究报告称，成熟TLS与对ICI和酪氨酸激酶抑制剂联合治疗的有利反应相关。相反，乳头状RCC和嫌色细胞RCC的TLS频率较低，其免疫微环境可能对TLS介导的抗肿瘤免疫支持较少，尽管该领域的研究仍然有限。

TLS在RCC的TME中的免疫调节

促进抗肿瘤免疫反应

TLS作为局部免疫枢纽，其中的B细胞在滤泡树突状细胞（FDCs）的支持下，产生高亲和力抗体，通过抗体依赖性细胞毒作用和吞噬作用促进肿瘤细胞破坏。TLS中T细胞和B细胞之间的相互作用进一步增强了免疫反应，并有助于长期免疫记忆，改善局部肿瘤监视并有助于预防复发。

免疫抑制因子的调节

TLS也吸引免疫抑制细胞亚群，如Tregs、调节性B细胞（Bregs）和MDSCs，它们通过多种机制限制抗肿瘤免疫，包括分泌抑制性细胞因子（如IL-10、TGF-β、IL-35）和表达检查点分子如CTLA-4和PD-1。在TLS内，Tregs主要位于T细胞区，它们通过CTLA-4介导的树突状细胞抑制和CD39驱动的腺苷产生来抑制局部CD4⁺⁺和CD8⁺⁺ T细胞的增殖和功能。TLS中的高Treg密度与减少的TLS介导的免疫监视和不良预后相关，如在NSCLC队列中所显示。此外，滤泡调节性T细胞，一个定位于B细胞滤泡内的CXCR5⁺⁺FOXP3⁺⁺亚群，可以抑制Tfh细胞并削弱B细胞反应，从而损害TLS成熟。产生IL-10的Breg细胞可能进一步促进TLS内的免疫抑制微环境，特别是在缺乏有组织生发中心的不成熟TLS中。这些调节亚群在TLS内的相对丰度和空间分布 critically 影响其结构和功能， favoring 免疫抑制的不平衡可以将TLS转化为允许肿瘤进展的生态位。

TLS与免疫治疗反应

TLS对免疫治疗效果的影响

TLS丰富肿瘤中ICIs的有效性

肿瘤微环境（TME）中TLS的存在显著增强抗肿瘤免疫反应，特别是在ICIs和CAR-T疗法中。在富含mTLS的肿瘤中，PD-L1表达通常较低或局限于TLS区域内，减少了免疫抑制并改善了ICI反应性，如延长的无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）所证明。在成熟TLS内，DCs捕获肿瘤抗原并激活CD4⁺⁺辅助T细胞和CD8⁺⁺细胞毒性T细胞，这些细胞分化为能够产生IFN-γ并介导直接肿瘤杀伤的效应细胞。同时，初始B细胞在与Tfh细胞和FDCs的相互作用下经历亲和力成熟和类别转换，产生分泌高亲和力抗体的浆细胞。这些抗体介导抗体依赖性细胞毒性（ADCC）和补体依赖性细胞毒性（CDC）。这种空间邻近性使得快速和局部的免疫启动成为可能，同时绕过了淋巴结运输，从而加强了细胞和体液抗肿瘤反应。

除了其存在和成熟度之外，TLS的空间定位已成为其免疫学影响的关键决定因素。瘤内TLS，特别是那些具有生发中心样特征的TLS，与增强的效应淋巴细胞活性和对抗PD-1治疗的有利反应相关。相比之下，瘤周TLS通常不成熟并被调节性T细胞和免疫抑制性巨噬细胞包围，与有限的ICI获益和较差的临床结局相关。这些发现强调了在评估TLS作为RCC中的生物标志物或治疗调节剂时，考虑成熟状态和空间分布的重要性。

TLS与CAR-T细胞疗法的潜在协同作用

CAR-T细胞疗法涉及对患者T细胞进行基因修饰，以增强其靶向特定肿瘤抗原的强大细胞毒性。CAR-T细胞在实体瘤中的疗效通常受到免疫抑制性TME的限制，但TLS可以通过支持局部免疫激活来增强CAR-T功能。TLS提供持续的抗原刺激和免疫支持，延长CAR-T细胞的持久性和活性。此外，TLS可以通过减少Tregs、MDSCs和免疫抑制性巨噬细胞的存在或活性来帮助重塑免疫抑制性肿瘤微环境，从而增强CAR-T细胞的浸润、扩增和细胞毒性。最近的研究表明，TLS诱导因子，如LIGHT，可以促进CCL19/CCL21表达，使肿瘤血管正常化，并促进淋巴样结构的形成，共同改善CAR-T细胞的运输和功能。这些发现表明，靶向TLS形成或将TLS促进细胞因子纳入CAR-T构建体（如LIGHT-CAR-T细胞）可能会克服实体瘤中的免疫抑制屏障并增强治疗结果。

TLS作为免疫治疗疗效的预后标志物

TLS在免疫治疗中的预后预测作用

TLS密度、空间定位和成熟状态与RCC的预后和免疫治疗疗效密切相关。mTLS在结构上以独特的B细胞滤泡、T细胞区、FDCs和HEVs为特征，这些共同支持有效的局部抗原呈递和免疫激活。这些结构包含经历体细胞高频突变和克隆扩增的B细胞，最终分化为产生IgG和IgA的浆细胞。这些浆细胞传播到肿瘤床，并通过抗体介导的机制有助于抗肿瘤反应，正如在接受ICIs的ccRCC患者中的空间转录组学和组织学研究所证明的那样。

相比之下，缺乏有组织生发中心且通常位于瘤周区域的imTLS，经常富含Tregs、肿瘤相关巨噬细胞和耗竭的CD8⁺⁺ T细胞。这些免疫抑制成分，以及imTLS有限的功能结构，导致次优的抗原呈递和减弱的效应反应，与对ICIs的敏感性降低和较差的生存结局相关。

将TLS与其他免疫标志物整合

将TLS分析与其他免疫标志物（如PD-L1表达、肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）和耗竭标志物（如TIM-3、LAG-3）相结合，提高了免疫治疗反应预测的准确性。PD-L1与mTLS密度结合增强了RCC中ICI反应预测的价值。TLS丰富肿瘤中TILs的丰度与免疫治疗疗效呈正相关，因为TLS和TILs共同表明了一个强大的免疫环境。此外，mTLS可以减轻T细胞耗竭，这表明将mTLS分析与耗竭标志物相结合可以进一步改进免疫治疗预测并指导个性化治疗。

RCC中TLS的调控机制

促进TLS形成的分子机制

趋化因子CXCL13与TLS形成

TLS的形成涉及多种趋化因子和免疫细胞之间的相互作用，其中CXCL13起着关键的调节作用。CXCL13主要由滤泡树突状细胞（FDCs）、成纤维细胞、活化的B细胞和巨噬细胞分泌，并与淋巴细胞上的CXCR5结合，指导CXCR5⁺⁺ B细胞和T细胞迁移并组织成TLS。在许多肿瘤中，CXCL13表达升高与增强的TLS形成和改善的免疫激活相关。然而，在RCC中，CXCL13可能发挥双重免疫学效应。除了其在支持TLS组装和B细胞成熟中的作用外，最近的研究发现，在ccRCC的瘤内区室中存在一群CXCL13⁺⁺CD8⁺⁺ T细胞，它们表现出耗竭表型，其特征是PD-1、TIGIT、TIM-3和CTLA-4的上调，以及IFN-γ和TNF-α表达的减少。这些细胞与富含Tregs、Th2细胞和肿瘤相关巨噬细胞的免疫逃避肿瘤微环境相关，并与较差的预后和受损的细胞毒性CD8⁺⁺ T细胞功能相关。

这些发现强调，CXCL13在RCC中的影响不仅取决于其细胞来源，还取决于肿瘤微环境的免疫背景。来自基质或淋巴组织者细胞的CXCL13可能促进保护性TLS组装，而产生CXCL13的耗竭CD8⁺⁺ T细胞可能反映或加强免疫抑制环境。因此，旨在调节CXCL13的治疗策略应考虑共同靶向抑制性通路（例如PD-1、TIGIT）或选择性地增强其在促免疫原性细胞群体中的表达，以促进TLS成熟而不加剧免疫耗竭。

TLS中的CXCR5阳性B细胞

CXCR5阳性B细胞在TLS的形成和维持中至关重要，它们通过响应CXCL13在TLS内形成B细胞滤泡。在TLS中，这些B细胞经历体细胞高频突变和亲和力成熟，产生肿瘤特异性抗体，并通过抗原呈递促进效应T细胞激活。在RCC中，富含CXCR5阳性B细胞的TLS与强大的抗肿瘤反应和增强的免疫治疗疗效相关。与Tfh细胞、DCs和FDCs的协作相互作用支持局部免疫监视并维持免疫反应。

影响TLS形成和功能的因素

肿瘤细胞分泌物与TLS

TLS的发育和功能受到肿瘤分泌因子、肿瘤基质和TME中其他成分的影响。促炎细胞因子，尤其是IFN-γ，通过激活DCs和上调CXCL13表达来促进TLS形成，增强免疫细胞招募和活性。相比之下，血管内皮生长因子（VEGF）是一种在RCC中大量表达的促血管生成分子，通过破坏HEVs的形成来损害TLS发育，从而限制淋巴细胞浸润和TLS内的抗原呈递。最近的临床前研究表明，VEGF抑制，特别是与PD-L1阻断联合使用时，可以通过激活LTβR信号通路恢复HEVs形成，随后增强TLS发育、细胞毒性T细胞浸润和肿瘤细胞凋亡。这些发现表明，抗VEGF治疗不仅使肿瘤血管正常化，而且还为TLS成熟创造了允许的免疫生态位，特别是在与免疫检查点抑制剂整合时。此外，RCC向糖酵解的代谢转变产生乳酸，使TME酸化，抑制DC成熟并损害TLS免疫功能，强调了靶向肿瘤代谢以增强TLS功效的潜力。

肿瘤基质和微环境调控

TME的物理和化学特性——包括成纤维细胞、细胞外基质（ECM）和氧水平—— critically 调节TLS的形成和功能。RCC中的癌症相关成纤维细胞（CAFs）分泌趋化因子如CXCL12以招募免疫细胞并维持TLS形成，同时也释放TGF-β，后者可以抑制TLS成熟和功能。此外，最近的研究发现了一种类似于FRCs的特殊成纤维细胞亚群，其特征是CCL19和podoplanin（PDPN）表达，它们形成细胞“轨迹”，指导T细胞在TLS内的迁移和组织。这些FRC样基质细胞创造了支持性生态位，促进TLS成熟和有效的T细胞激活。此外，ECM为TLS发育提供了必要的结构支持。适当的基质组成有助于免疫细胞滞留和区室化，而过度的ECM沉积或纤维化会损害免疫细胞运输并破坏TLS结构。

TLS的临床应用与RCC免疫治疗

TLS作为免疫治疗策略中的靶点

激活TLS以增强免疫治疗

TLS通过支持抗原呈递、T细胞激活和免疫记忆在抗肿瘤免疫中起关键作用。增强TLS形成可能会改善免疫治疗结果，因为具有高密度mTLS的RCC患者通常对PD-1或PD-L1抑制剂表现出更好的反应和延长的OS。这表明TLS不仅可以作为免疫治疗反应的生物标志物，还可以作为通过加强TME内的免疫激活来提高治疗效果的 therapeutic 靶点。

联合治疗：TLS调节剂与ICIs

将TLS调节剂与ICIs（如PD-1/PD-L1和CTLA-4抑制剂）相结合，可以增强RCC的治疗反应。临床前研究表明，当与ICIs联合使用时，CXCL13或IL-36等药物通过促进T细胞浸润和激活来放大抗肿瘤效果。将VEGF抑制剂（如贝伐珠单抗）与PD-1抑制剂相结合的临床试验在RCC中显示出有希望的结果，改善了PFS和OS。尽管有这些进展，TLS在患者间的异质性仍然是一个挑战，强调了对预后生物标志物的需求以指导个性化治疗策略。

最新研究结果表明，IL-33作为一种新型的TLS诱导细胞因子，具有转化相关性。IL-33由发炎组织释放，激活第2组先天淋巴样细胞（ILC2s），后者产生淋巴毒素并与淋巴毒素β受体（LTβR）⁺⁺髓系细胞结合以启动淋巴新生。虽然大多数机制见解来源于胰腺癌和结肠炎模型，但IL-33⁺⁺基质细胞和淋巴新生ILC2s也在人类肿瘤中被检测到，并与增加的TLS形成和改善的预后相关。重组IL-33已被证明可以扩展瘤内TLS和ILC2群体，在临床前研究中增强抗肿瘤 immunity。这些发现表明，IL-33–ILC2–LTβR轴可能代表一个 promising 靶点，以促进TLS发育并改善RCC中的ICI反应性，值得在RCC特定环境中进行进一步研究。

调节TLS的潜在治疗策略

促进TLS形成

通过药物或基因治疗靶向TLS形成以增强抗肿瘤免疫是一种有前途的方法。增加CXCL13或IL-36水平已在临床前模型中证明成功增强TLS形成。靶向淋巴毒素β受体信号通路也促进TLS发育，这可能进一步增强免疫治疗疗效。然而，需要精确调节这些因子以避免过度的免疫激活和潜在的自身免疫效应，这需要仔细的剂量和时间安排以供临床应用。

调节TLS微环境

可以通过调整TME来进一步改善TLS功能，例如减少抑制TLS免疫反应的乳酸积累。乳酸抑制剂，如二氯乙酸酯，已在临床前模型中显示出增强免疫反应的潜力。调节ECM和肿瘤基质，特别是通过CAF靶向剂，可能有助于免疫细胞浸润并支持TLS形成。然而，在人类中安全地靶向这些通路需要进一步研究。

TLS在RCC治疗中的临床研究与前景

TLS相关临床试验

越来越多的临床证据支持TLS，特别是成熟瘤内TLS，在增强多种实体瘤免疫治疗疗效方面的预测价值。在RCC中，一项涉及102名患者的纳武利尤单抗（nivolumab）II期临床试验（NCT03117309）显示，应答者表现出TLS相关基因特征的富集，并且耗竭的组织驻留CD8⁺⁺ T细胞低丰度与更好的结局相关。空间转录组学分析进一步证明，瘤内TLS维持B细胞成熟为产生IgG和IgA的浆细胞，这有助于肿瘤细胞清除并与接受ICI治疗患者的延长无进展生存期相关。此外，在一项655名ccRCC患者的队列中，瘤内次级滤泡样TLS（SFL-TLS）与对PD-1/PD-L1阻断的有利反应相关，而瘤周早期TLS与免疫抑制微环境和较差的结局同时发生。尽管直接的TLS靶向临床试验仍然稀少，但这些研究共同强调了TLS成熟和空间分布作为RCC反应预测和个性化免疫治疗的有前途的生物标志物。

TLS在个性化治疗中的应用

TLS通过细化TME内的免疫分析，为个性化免疫治疗提供了显著潜力。除了单纯的存在之外，诸如TLS密度、成熟状态、空间分布和分子亚型等因素正在成为临床分层的关键参数。

Mao 等人进行了一项结直肠癌的多中心队列研究，揭示了左右侧肿瘤间TLS密度的显著差异，右侧癌症中观察到更高的丰度和预后价值。他们开发了TLS整合的列线图，在预测生存方面优于传统的AJCC分期系统，强调了TLS对于亚型特异性预后和治疗计划的临床效用。另一项利用多组学和数字病理学的大规模研究确定了结直肠癌中三种转录不同的TLS模式，每种都与独特的生物学行为和治疗反应相关。从核心TLS signature 基因衍生出的定量TLSscore被开发用于捕捉个体TLS profile。该评分证明了对免疫治疗和化疗结果的预测价值。值得注意的是，具有低TLSscore（指示免疫激活的TLS亚型）的患者表现出更好的预后和更大的免疫检查点抑制剂获益，而高TLSscore患者对化疗反应更有利。

虽然类似的基于TLS的分类器尚未在RCC中建立，但新兴技术如空间转录组学、单细胞分析和数字病理学正在为其发展奠定基础。将TLS分析与额外的免疫标志物（如PD-L1表达、肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）和T细胞耗竭特征）相结合，将提高针对具有不同免疫景观的RCC患者的免疫治疗 precision。

前景与挑战

TLS在RCC肿瘤免疫治疗中的潜力

TLS在RCC免疫治疗中的潜力主要体现为其作为预后生物标志物、治疗靶点及其与ICIs的协同效应。通过评估TLS密度和成熟度，临床医生可以更好地对患者进行分层，并根据TLS的存在制定个性化治疗计划。为了推进TLS在RCC免疫治疗中的临床应用，未来的研究需要解决几个关键问题。

尽管TLS密度和成熟度已被证明与免疫治疗反应相关，但其检测和定量的方法尚未标准化。未来的研究应专注于开发更精确的TLS检测技术，如成像、生物标志物分析或高通量测序，以准确评估不同患者的TLS状态。此外，TLS的形成和功能受到各种TME因素的影响，包括趋化因子、细胞因子和肿瘤代谢。未来的研究可以更深入地探讨TLS在不同肿瘤阶段和患者群体中的运作机制，特别是如何调节这些因素以增强TLS功能。此外，TLS调节剂的开发和优化将是推进其临床应用的关键一步。更重要的是，为了将TLS整合到RCC免疫治疗的标准方案中，需要进行大规模、多中心临床试验来验证TLS作为预后生物标志物和治疗靶点的可行性。这些研究将为TLS在个性化治疗中的广泛应用提供 robust 的临床证据。

TLS研究中的技术和方法学挑战

尽管TLS在RCC免疫治疗中的潜力日益得到认可，但相关研究面临许多技术和方法学挑战。作为TME的动态结构，TLS的复杂调控机制和异质性给研究带来了 significant 困难。目前，TLS检测主要依赖于病理学技术，如免疫组织化学和多重染色方法。然而，TLS的异质性导致不同肿瘤中TLS的形成、密度和成熟度存在显著差异，TLS的标准化定义和定量方法尚未完全建立。未来的研究将需要开发更灵敏和精确的检测方法，以标准化不同肿瘤类型间的TLS评估。

TLS包含多种免疫细胞，这些细胞的功能在不同肿瘤类型、阶段和患者间可能存在显著差异。因此，研究TLS的功能面临与细胞间信号网络调控相关的复杂问题。研究TLS内免疫细胞的相互作用将需要更精细的单细胞测序技术和空间转录组学方法。这些将有助于解码TLS内免疫细胞的功能分化状态以及它们如何调节抗肿瘤免疫反应。此外，TLS的异质性对其临床应用构成了 major 挑战。密度、空间分布和结构成熟度的变化——从imTLS到成熟（mTLS）形式——导致了 diverse 的免疫学效应。虽然mTLS通常与活跃的抗肿瘤免疫和有利的结局相关，但imTLS的作用更为微妙。新兴证据表明，imTLS在某些背景下可能有助于免疫抑制或耐受，尽管将它们统一归类为抑制性可能过于简单化。在体内，im