延长囊胚培养时间提升非侵入性胚胎染色体筛查（niPGT-A）DNA产量，但诊断特异性仍受限

　　本研究针对非侵入性胚胎染色体筛查（niPGT-A）临床可靠性未经验证的问题，通过前瞻性配对样本设计比较niPGT-A与滋养层活检（TE biopsy）的诊断性能。研究发现延长培养至第6天显著提高niPGT-A信息率（69.4%→97.9%），但特异性仅50.7%，33个假阳性胚胎中94%获得临床妊娠，揭示当前niPGT-A可能错误排除可移植胚胎，亟需优化cfDNA分析方案。

　　

在辅助生殖领域，胚胎染色体筛查是提高试管婴儿成功率的关键技术。目前临床金标准——滋养层活检（TE biopsy）虽能准确检测染色体异常，但需从胚胎中提取细胞，存在操作创伤风险。近年来，一种颠覆性的非侵入性检测技术（niPGT-A）应运而生，它仅需分析胚胎培养液中释放的细胞游离DNA（cfDNA）即可完成遗传评估，理论上完全避免了对胚胎的物理干预。然而，这种看似完美的技术却面临根本性质疑：培养液中的DNA是否真正代表胚胎的真实染色体状态？其临床可靠性是否足以替代传统活检？

为解答这些关键问题，来自台湾Lee Women's Hospital的研究团队在《Scientific Reports》发表了突破性研究成果。他们通过前瞻性配对样本研究，对98对夫妇的212个囊胚同步进行niPGT-A和TE活检检测，首次在盲法设计下系统评估了两者的诊断一致性与临床结局相关性。

研究采用单中心前瞻性队列设计，纳入2021-2022年期间接受ICSI（卵胞浆内单精子注射）治疗的98对夫妇产生的212个囊胚。所有胚胎在培养至第5或第6天时，同步收集滋养层活检样本和培养液样本（SCM），使用Illumina的VeriSeq PGS Kit进行靶向测序分析。关键技术包括：严格无菌操作避免污染、SurePlex全基因组扩增系统、Illumina MiSeq测序平台以及BlueFuse Multi软件染色体分析。胚胎移植决策完全基于TE活检结果，niPGT-A结果对临床团队设盲。

PGT-A outcomes and DNA yield: analysis of TE biopsy and spent culture media

研究发现培养持续时间显著影响niPGT-A的信息获取率。第5天囊胚的信息率仅为69.4%，而延长培养至第6天时跃升至97.9%，表明延长培养可大幅提升cfDNA的可获取量。然而，niPGT-A检测出的非整倍体率（75.3%）显著高于TE活检（58.5%），提示可能存在假阳性风险。

Concordance rates between TE biopsy and SCM in day 5 and day 6 blastocysts

两种方法的总体染色体一致性为75.9%，其中完全一致性仅50.0%。令人惊讶的是，性别染色体判断达到100%一致，说明Y染色体检测可能因序列特殊性而更可靠，但这不能代表全染色体组的准确性。

Diagnostic accuracy of SCM versus TE biopsy for PGT-A: sensitivity and specificity analysis

niPGT-A展现高灵敏度（91.6%）但低特异性（50.7%）的特征，意味着它能有效捕捉异常胚胎，却容易将正常胚胎误判为异常。这种特异性缺陷在第5天和第6天囊胚中保持一致，表明培养时间延长并未改善诊断特异性。

Clinical outcomes post-embryo transfer

最令人震惊的发现来自临床结局：被niPGT-A判为异常但TE活检正常的16个胚胎，移植后获得94%的临床妊娠率和88%的活产率，远高于两者一致正常的胚胎组（57%妊娠率）。这证明niPGT-A的假阳性可能导致可移植胚胎被错误废弃。

研究结论明确指出，尽管延长培养时间能提高niPGT-A的DNA产量，但其诊断特异性不足严重限制临床适用性。培养液中的cfDNA可能源自凋亡细胞或母源污染，不能完全代表胚胎真实染色体状态。讨论部分强调，当前niPGT-A技术尚不能替代TE活检，必须进一步优化cfDNA提取、污染控制和生物信息学分析流程。这项研究为niPGT-A的临床应用提供了关键警示：在缺乏充分验证的情况下，盲目采用非侵入性检测可能导致优质胚胎的错误丢弃，反而降低整体试管婴儿成功率。未来需要建立标准化操作流程和完善的质量控制体系，才能让这项技术真正造福不孕症患者。