灵芝多糖通过调节肠道微生物群来影响TLR4/NF-κB/MAPK通路，并激活AMPK通路，从而缓解非酒精性脂肪肝疾病

《Journal of Ethnopharmacology》：Ganoderma lucidum polysaccharides alleviate non-alcoholic fatty liver disease by modulating gut microbiota against TLR4/NF-κB/MAPK pathway and activating AMPK pathway

　　灵芝多糖EPGLa通过调节肠道菌群抑制TLR4/NF-κB/MAPK通路并激活AMPK通路改善非酒精性脂肪肝，其结构经核磁共振等证实为均一中性多糖。

　　Ganoderma lucidum，作为一种广受赞誉的传统中药，长期以来被用于治疗多种代谢性疾病。它不仅在亚洲国家被广泛使用，而且其药用价值在《本草纲目》中也有详细记载。Ganoderma lucidum含有多种活性成分，其中多糖被认为是其主要的治疗成分之一，具有抗炎、抗动脉粥样硬化、抗氧化、免疫调节、抗癌和保肝等多重功效。然而，尽管其药用价值已被广泛认可，但对于其多糖成分在治疗非酒精性脂肪肝病（NAFLD）中的具体疗效及其作用机制，仍需进一步研究。

NAFLD作为一种慢性肝病，其特征是肝脏中脂肪过度积累，包括脂肪变性、炎症、纤维化、肝硬化和肝细胞癌等病理状态。随着全球范围内NAFLD的患病率逐渐上升，它已成为全球公共卫生面临的重要挑战。目前，针对NAFLD的治疗手段有限，且大多数药物存在一定的副作用，长期使用可能增加肝脏负担。因此，开发一种新的天然、有效的物质来干预NAFLD成为临床急需。

近年来，越来越多的研究表明，NAFLD的发生和发展与肠道菌群失调密切相关。一些研究表明，在NAFLD患者和动物模型中，肠道菌群的组成与正常群体相比发生了显著变化。同时，粪菌移植（FMT）也被证明能够改善肠道菌群的组成，从而缓解NAFLD。LPS，即脂多糖，是这些代谢物中最常研究的微生物分子之一，它在激活TLR4受体方面发挥着关键作用，进而引发NAFLD的炎症级联反应。此外，肠道菌群产生的短链脂肪酸（SCFAs）在激活AMPK通路方面也具有重要作用。AMPK作为细胞代谢中的关键能量传感器，在脂代谢过程中抑制脂肪酸合成和脂肪酸氧化，从而减轻NAFLD。

基于上述研究背景，本研究假设EPGLa（一种从Ganoderma lucidum中提取的多糖）可能通过调节肠道菌群来对抗TLR4/NF-κB/MAPK通路，同时增强SCFA的产生以激活AMPK通路，从而改善NAFLD。为此，本研究采用酶解法提取并制备EPGL，并通过DEAE Seplife FF柱和Sephacryl S-400HR柱进行纯化。随后，我们评估了EPGLa在治疗NAFLD中的疗效，并深入探讨了其作用机制。

在实验过程中，我们首先对EPGLa的化学结构进行了详细分析。通过单糖组成分析、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、分子量测定、甲基化分析以及一维/二维核磁共振（NMR）光谱等技术，我们确定了EPGLa的结构特征。结果显示，EPGLa的主链由以下糖苷键组成：→6)-β-D-Glc-p-(1→，→3)-β-D-Glc-p-(1→，→4,6)-α-D-Glc-p-(1→，→3,6)-β-D-Man-p-(1→，→2)-α-D-Man-p-(1→，以及→4)-β-D-Gal-p-(1→。其分支则由β-D-Glc-p-(1→、β-D-Glc-p-(1→3)-β-D-Glc-p-(1→，以及α-L-Fuc-p-(1→组成。此外，EPGLa的糖含量为93.87%，蛋白质含量为0.94%，表明其具有较高的纯度和活性。

在动物实验中，我们通过建立NAFLD小鼠模型，评估了EPGLa的治疗效果。结果表明，EPGLa能够有效缓解NAFLD，其作用机制主要体现在两个方面：一是促进有益肠道菌群的生长，修复肠道屏障，从而减少LPS对TLR4的激活，抑制炎症反应；二是通过增强SCFA的产生，激活AMPK通路，进而调节脂代谢，减少脂肪堆积。为了进一步验证这些发现，我们采用了粪菌移植（FMT）技术，结果显示EPGLa确实能够调节肠道菌群的组成，从而改善NAFLD的病理状态。

本研究的发现不仅为EPGLa在治疗NAFLD中的应用提供了坚实的科学依据，也为其他具有生物活性的多糖类物质的治疗靶点提供了新的思路。EPGLa作为水溶性多糖，具有良好的生物活性和安全性，有望成为一种新型的天然药物，用于干预NAFLD。此外，本研究还强调了肠道菌群在NAFLD发病机制中的重要作用，为未来的治疗策略提供了新的方向。

在研究过程中，我们还对实验所用的化学试剂和试剂进行了详细的记录。所有用于本研究的商业检测试剂盒、一抗、二抗以及其他相关试剂的信息均列于表S1中。此外，EPGLa的制备和纯化过程也进行了详细的描述。我们采用酶解法提取EPGLa，并通过DEAE Seplife FF柱和Sephacryl S-400HR柱进行纯化，最终获得具有单一对称峰的EPGLa，表明其具有高度的纯度和均匀性。

在FT-IR分析中，我们对EPGLa的特征吸收峰进行了评估。结果表明，EPGLa的红外光谱显示出明显的吸收特征，进一步验证了其化学结构的正确性。此外，我们还对EPGLa的分子量进行了测定，结果显示其分子量为33.602 kDa，表明其具有中等分子量，可能更容易被人体吸收并发挥药理作用。

本研究的讨论部分进一步分析了EPGLa在治疗NAFLD中的作用机制。一些研究表明，通过酶解法获得的多糖具有更高的生物活性。在本研究中，EPGLa正是通过酶解法提取获得的，这可能与其较高的生物活性有关。此外，多糖的生物活性与其分子量和化学结构密切相关。与之前的研究相比，EPGLa的分子量相对较小，这可能与其较高的生物活性有关。

综上所述，本研究通过系统的化学分析和动物实验，揭示了EPGLa在治疗NAFLD中的作用机制。EPGLa不仅能够通过调节肠道菌群来对抗炎症反应，还能通过增强SCFA的产生来激活AMPK通路，从而改善脂代谢，减轻NAFLD的病理状态。这些发现为未来开发基于多糖类物质的天然药物提供了新的思路，也为NAFLD的治疗策略提供了科学依据。此外，本研究还强调了肠道菌群在NAFLD发病机制中的重要作用，为未来的研究提供了新的方向。

在研究过程中，我们还对实验数据进行了详细的分析和处理。通过使用专业的软件工具，我们对实验数据进行了系统的整理和分析，确保了研究结果的准确性和可靠性。此外，我们还对实验中的变量进行了严格的控制，以排除其他因素对实验结果的干扰。这些方法的应用使得本研究能够获得高质量的实验数据，并为结论的得出提供了坚实的科学基础。

本研究的结论部分总结了EPGLa的结构特征和作用机制。EPGLa作为从Ganoderma lucidum中提取的多糖，具有良好的水溶性和生物活性。其结构特征表明，它是一种均质的中性多糖，具有特定的糖苷键组成和分支结构。这些结构特征可能与其在治疗NAFLD中的作用机制密切相关。通过系统的实验研究，我们发现EPGLa能够有效缓解NAFLD，其作用机制主要体现在促进有益肠道菌群的生长和增强SCFA的产生，从而调节脂代谢和抑制炎症反应。

本研究的成果不仅为EPGLa在治疗NAFLD中的应用提供了科学依据，也为其他具有生物活性的多糖类物质的治疗靶点提供了新的思路。随着对NAFLD发病机制的深入研究，越来越多的证据表明，调节肠道菌群和激活AMPK通路是治疗NAFLD的重要策略。因此，EPGLa作为一种具有天然来源和生物活性的多糖，有望成为一种新型的治疗药物，用于干预NAFLD。此外，本研究还强调了肠道菌群在NAFLD发病机制中的重要作用，为未来的治疗策略提供了新的方向。

本研究的作者贡献部分明确了各作者在研究中的具体工作。Ningning Liu和Yun Li负责撰写原始草稿、软件开发、实验设计、数据整理和分析；Huajie Zhao负责撰写和修改论文、资源协调、项目管理、实验方法设计、资金获取；Baoguo Deng和Guofang Li负责实验验证、软件开发、资源协调、实验方法设计和概念提出。这些分工使得本研究能够顺利进行，并取得高质量的成果。

在研究过程中，我们还对未引用的参考文献进行了说明。Chen et al., 2024; Li et al., 2024; Li et al., 2022; Zhang et al., 2021; Zhang et al., 2024等文献中的研究结果为本研究提供了重要的理论支持。然而，由于某些文献未被引用，我们在此进行了说明，以确保研究的完整性和科学性。

本研究的声明部分强调了作者在研究中不存在任何利益冲突。我们确认所有列出的作者都已审阅并同意提交的论文，且该论文或其任何部分内容尚未发表或被其他期刊接受。此外，本研究符合当前的伦理规范，作者在研究中不存在个人或机构利益冲突，研究过程中使用的材料和设备均符合相关标准。

最后，本研究的致谢部分对支持本研究的机构和资金来源进行了感谢。本研究得到了国家自然科学基金（Grant number: 82304113, 22107089 and 52271251）、河南省科技研究项目（Grant number: 242102310526）、河南省自然科学基金（Grant number: 242300421210）、新乡医学院博士科研基金（Grant number: XYBSKYZZ202123）以及新乡医学院科技新星计划的支持。这些资金的支持使得本研究能够顺利进行，并取得高质量的成果。

综上所述，本研究通过系统的化学分析和动物实验，揭示了EPGLa在治疗NAFLD中的作用机制。EPGLa不仅能够通过调节肠道菌群来对抗炎症反应，还能通过增强SCFA的产生来激活AMPK通路，从而改善脂代谢和减轻NAFLD的病理状态。这些发现为未来开发基于多糖类物质的天然药物提供了新的思路，也为NAFLD的治疗策略提供了科学依据。此外，本研究还强调了肠道菌群在NAFLD发病机制中的重要作用，为未来的治疗策略提供了新的方向。