《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Open》：A self-assembled nanocomplex from starch-protein- fatty acid: Thermodynamics of self-assembly
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Graves’眼病靶向治疗研究：CT102反义寡核苷酸通过抑制IGF-1R信号通路改善大鼠模型症状，优于单抗及miRNA疗法，为临床转化提供依据
周玉婷|王伟杰|宋庚申
北京优凯创 pharmaceutical technology co., ltd., 北京 100176, 中国
摘要
格雷夫斯眼病（Graves’ ophthalmopathy, GO）是一种眶内炎症性自身免疫疾病，治疗选择有限。随着对疾病发病机制理解的深入，特别是对眶内成纤维细胞中失调的胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）信号网络的认知，针对IGF-1R的靶向疗法应运而生。本研究旨在评估CT102这种IGF-1R靶向反义寡核苷酸（ASO）的临床前治疗潜力。ASO是一类具有前景的治疗手段，因为它们可以直接调节致病基因及其变异体，为传统的“蛋白质特异性”疗法提供了有力的替代方案。通过腹腔注射牛甲状腺球蛋白建立了与GO相关的大鼠模型，并通过血清甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）水平升高和血清促甲状腺激素（TSH）水平降低来验证该模型的有效性。该模型表现出眼外肌的稳定且一致的病理改变。CT102的眼内给药耐受性良好，高剂量CT102治疗显示出治疗效果，表现为眼肌组织中IGF-1R水平的下调以及病理异常的减轻。与正常对照组相比，高剂量CT102组患者的GO相关生物标志物（包括血清TPO-Ab和血清TSH水平）得到了恢复。此外，CT102在调节GO相关生物标志物方面优于两种阳性对照：美国食品药品监督管理局（FDA）批准的唯一抗IGF-1R抗体teprotumumab和RNA治疗药物miR-143。我们的研究首次为CT102在GO患者中的临床试验提供了依据，并强调了抗IGF-1R ASO作为GO治疗策略的潜力。
引言
格雷夫斯眼病（Graves’ ophthalmopathy, GO），也称为甲状腺相关眶病（thyroid-associated orbital disease, TAO）、甲状腺眼病（thyroid ophthalmopathy）或甲状腺眼病（thyroid eye disease, TED），是一种主要影响眶组织的自身免疫性疾病，与最常见的甲状腺功能亢进症原因——格雷夫斯病（Graves’ disease）密切相关（1, 2）。新发GO病例的年发病率估计为每10万人25-50例（3）。临床表现包括突眼、眼睑回缩、眼球突出、限制性斜视伴复视、因暴露引起的干眼症以及甲状腺性视神经病变（4）。尽管GO的发病机制尚未完全明了，但已知眶内成纤维细胞（orbital fibroblasts, OFs）是自身抗原——促甲状腺激素受体（thyroid-stimulating hormone receptor, TSHR）的主要靶标，从而导致炎症反应和组织损伤（5, 6）。
目前GO的一线治疗方法主要依赖于高剂量糖皮质激素，常结合眶内放射治疗或手术减压（1, 7）。然而，这些治疗方法的效果有限，主要局限于缓解眶内炎症，缺乏支持长期维持效果的充分证据（8）。值得注意的是，糖皮质激素治疗常伴有不良反应，并且在停药后存在复发风险（9）。此外，高剂量静脉注射类固醇可能导致严重的肝功能障碍，需要密切监测患者情况。GO的管理面临挑战，部分原因是该疾病的异质性以及难以预测疾病进展（10）。
参与GO发病机制的具体受体、细胞因子和免疫细胞已成为有前景的治疗靶点。胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）是一种跨膜酪氨酸激酶受体，在细胞增殖和凋亡中起关键作用（11）。在GO患者的眶内成纤维细胞中观察到IGF-1R表达上调，IGF-1R与TSHR之间的相互作用是一个有前景的治疗靶点（12）。鉴于该受体在GO眶组织中的高表达水平，抑制IGF-1R可能对GO患者有益。2020年，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了针对IGF-1R的单克隆抗体teprotumumab用于治疗GO（13），为这种疾病提供了新的治疗途径。然而，生物制剂对许多患者来说仍然价格昂贵，并且存在包括听觉并发症在内的不良反应风险（14）。
反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides, ASOs）是人工合成的短核苷酸序列，旨在精确靶向其他核苷酸，通常是RNA分子（15）。作为传统“蛋白质特异性”疗法的有力替代品，ASO通过与目标RNA转录本通过沃森-克里克碱基配对进行特异性结合，从而直接调节致病基因及其变异体。与单克隆抗体相比，ASO具有成本更低、免疫原性更低和给药频率更低的优点。目前已有15种ASO获得批准，应用于病毒感染、代谢性疾病以及神经和炎症性疾病（16）。迄今为止，尚无文献描述抗IGF-1R ASO在GO治疗中的应用。此前，我们证明了CT102这种针对人IGF1R mRNA的磷硫代脱氧寡核苷酸在体内对抗肝癌的治疗潜力（17）。一项I期临床研究证实了CT102在肝癌患者中的安全性和耐受性，为其在II期临床试验中的进一步研究奠定了基础（17）。
鉴于IGF-1R在GO发病机制中的关键作用，我们假设CT102可能成为GO的潜在靶向治疗候选药物。我们建立了与GO相关的大鼠模型，并评估了CT102在体内的治疗效果。
CT102的合成
CT102是通过使用OligopilotTM 400寡核苷酸合成器（Cytiva, 美国）的固相合成方法合成的。具体步骤包括：使用二氯乙酸去除5’-DMT保护基团dA(bz)，随后分离5’-Hydroxysourate基团；将dC(bz) 2’-Ome-U酰胺溶解在乙腈中，并用5-Ethylthio-1H-Tetrazole活化；然后形成活性中间体，再与5’-Hydroxysourate发生缩合反应。
CT102在体内的耐受性良好
由于女性患者中GO的发病率是男性的3至4倍（22），本研究选择了雌性大鼠。CT102每周一次经眼部给药（O.U.），持续4周，同时每周监测体重直至安乐死。在第一批实验中，MC组有一只大鼠在治疗后第1天出现腹部膨胀，并在第3天死亡；CT102-2组有一只大鼠在第20天死亡。其余动物未观察到其他异常体征。平均体重
讨论
通过反复腹腔注射牛甲状腺球蛋白，我们成功建立了GO的大鼠模型，这导致了Wistar大鼠的眶内病理变化。模型的有效性通过TPO-Ab水平升高、TSH水平降低以及双侧病理变化的持续性得到证实。该GO相关大鼠模型满足了药理学研究的基本要求，包括存在针对TSHR的自身抗体
作者贡献声明
周玉婷：撰写 – 审稿与编辑、方法学设计、数据分析、概念构建。王伟杰：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据分析。宋庚申：撰写 – 审稿与编辑、结果验证、实验监督、项目管理、资金筹集。致谢
我们感谢所有参与研究的机构。
资金支持
本研究由北京优凯创 pharmaceutical technology co., ltd. 资助。所有作者均受雇于北京优凯创 pharmaceutical technology co., ltd.
