综述：基于免疫测定的特应性皮炎生物标志物

《Clínica e Investigación en Ginecología y Obstetricia》：Immunoassay-based biomarkers in atopic dermatitis

　　特应性皮炎（AD）全球患病率高，传统评估方法不足。本文综述免疫检测技术如ELISA、 bead-based multiplexing等，评估TARC/CCL17、IL-13等生物标志物，强调标准化皮肤取样和参考区间的重要性，以推动精准诊疗。

　　在全球范围内，特应性皮炎（Atopic Dermatitis, AD）是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病，影响着约2.6亿人，其中儿童的患病率高于成人，分别达到4.0%和2.0%。根据最近的荟萃分析，儿童和青少年的患病率估计为11.1%，而成年人则为6.3%。这种疾病具有显著的性别差异，女性患病率略高于男性（2.8% vs. 2.4%）。AD不仅是一种常见的非致命性疾病，还被认为在疾病负担调整后的人均寿命年中，是导致残疾的主要原因之一。AD的特征是严重瘙痒的红斑性皮损，并且这些皮损的分布模式与年龄相关。婴儿通常表现为面部和伸侧部位的皮损，而年长的儿童和成人则多见于屈侧部位，如肘窝和腘窝。疾病从急性阶段开始，表现为严重瘙痒和糜烂性皮损，随后发展为慢性苔藓化皮肤，并且在超过90%的患者中，皮肤表面被金黄色葡萄球菌定植。

AD的发病机制涉及复杂的相互作用，包括遗传易感性、表皮屏障功能障碍以及免疫失衡。在欧洲人群中，约有10%的人携带角质形成细胞相关蛋白（filaggrin, FLG）的突变，这会导致表皮屏障功能受损和经表皮水分丢失（transepidermal water loss, TEWL）增加。这种屏障功能的破坏使得患者更容易受到过敏原的渗透和微生物的定植。在急性期，免疫反应以Th2主导，表现为高水平的IL-4、IL-5和IL-13，而在慢性期则以Th1为主导。此外，AD不仅对皮肤造成负担，还对患者的心理健康产生显著影响，如成年人中AD患者的抑郁率高达56.9%，而对照组仅为15.7%。AD的经济负担也十分巨大，与对照组相比，AD患者的年度医疗费用平均高出2687美元。在儿童中，AD常伴随其他过敏性疾病，如哮喘（40.5%）、过敏性鼻炎（27.5%）和食物过敏（24.1%）。

现有的临床评估系统，如SCORAD、EASI和IGA，虽然广泛应用于AD的诊断和病情评估，但它们提供的信息有限，无法充分反映疾病的分子异质性，也难以指导个体化的治疗选择。随着精准皮肤病学的发展，对客观且可重复的生物标志物的需求日益增加，以实现准确的诊断、疾病分层和治疗监测。免疫分析平台，如单分析ELISA、基于珠子的多重免疫分析、邻近扩展蛋白质组学和超高灵敏度数字免疫分析，已成为AD生物标志物发现和验证的重要工具。这些平台能够定量分析多种蛋白质，包括细胞因子、趋化因子和应激蛋白，从而为临床应用提供更全面的信息。

为了确保免疫分析的准确性，需要明确一系列参数，如空白限、检测限和定量限。此外，还需评估分析方法的精密度、范围、线性度、交叉污染效应、方法比较、干扰评估、异嗜性抗体效应、校准和外部质量标准。这些参数对于实验室的常规操作至关重要，有助于确保结果的可靠性和一致性。临床性能评估则依赖于诸如曲线下面积（AUC）、似然比和决策限等指标，以衡量生物标志物的诊断价值和临床实用性。相比之下，传统的生物标志物，如总IgE、外周嗜酸性粒细胞计数和肥大细胞颗粒酶，其临床应用价值不如新兴的生物标志物。新兴的生物标志物，如TARC/CCL17、IL-13、IL-22、IL-31、SCCA1/SCCA2和periostin，已被证明在诊断和病情评估中具有更高的准确性和可靠性。

在实际应用中，获取样本的方式对生物标志物的检测至关重要。传统的血液样本，如血清和血浆，虽然在临床中广泛应用，但近年来非侵入性的皮肤采样技术，如胶带剥离和微针采集，也逐渐受到关注。这些技术能够更有效地收集表皮生物标志物，从而提供更贴近疾病发生部位的信息。例如，胶带剥离技术可以用于分析表皮中的脂质组成，而微针采集则可以用于获取皮肤组织样本，以研究特定的细胞因子水平。这些采样技术不仅提高了生物标志物检测的准确性，还减少了患者的不适感，使得样本采集更加便捷和安全。

在生物标志物的检测和验证过程中，还需要考虑多个因素，包括样本的类型、检测方法的选择以及生物标志物的临床意义。例如，TARC/CCL17作为一项重要的生物标志物，已被证明在所有年龄段的AD患者中都能可靠地反映疾病严重程度。它不仅与疾病活动相关，还能揭示可能被临床检测忽略的亚临床炎症。近年来的研究进一步确认了TARC作为评估AD严重程度的最优指标，尽管不同研究方法可能存在差异。除了Th2相关的生物标志物，SCCA2（SERPINB4）在单独或与其他生物标志物联合使用时，也显示出与临床严重评分显著相关的趋势。这些生物标志物的检测不仅有助于诊断，还能用于治疗监测和病情评估。

此外，精准皮肤病学的发展不仅依赖于生物标志物的发现，还需要结合多组学技术，如基因组学、蛋白质组学和代谢组学，以更全面地理解AD的复杂性。通过多组学方法，可以识别不同表型和内型的患者群体，并根据其治疗反应进行分类。例如，一些研究利用免疫分析与多组学方法的结合，成功地将AD患者分为具有不同治疗反应的亚群。这种分类方法有助于实现更个体化的治疗策略，提高治疗的有效性和安全性。

在实际应用中，尽管免疫分析技术取得了显著进展，但仍面临诸多挑战。例如，AD的异质性使得生物标志物的标准化和统一解释变得困难。Th2、Th1、Th17和Th22主导的免疫反应模式在不同患者中可能表现出复杂的共表达，使得精确分类变得复杂。因此，需要进一步研究和开发标准化的皮肤采样方法、针对特定人群的参考区间以及跨平台的统一标准，以提高生物标志物的临床应用价值。此外，还需要建立共识驱动的截断值，以确保生物标志物的诊断意义和临床实用性。

在推动AD生物标志物的临床转化过程中，标准化和一致性是关键因素。目前，许多实验室在使用免疫分析技术时，缺乏统一的采样和检测方法，导致结果的可比性和可靠性受到影响。因此，建立标准化的皮肤采样流程、定义针对不同人群的参考区间、确保跨平台的统一标准以及制定共识驱动的截断值，是实现精准皮肤病学的重要步骤。这些措施不仅有助于提高生物标志物的诊断价值，还能为治疗选择和病情监测提供更可靠的依据。

随着精准皮肤病学的发展，生物标志物的应用范围也在不断扩大。除了传统的血液样本，皮肤组织样本的采集和分析也成为重要的研究方向。通过非侵入性的采样技术，可以更有效地获取表皮中的生物标志物，从而提供更贴近疾病发生部位的信息。例如，一些研究利用胶带剥离技术分析表皮中的脂质组成，发现其与AD的严重程度密切相关。此外，微针采集技术能够减少患者的不适感，提高样本采集的可行性，为研究表皮中的细胞因子水平提供了新的途径。

在实际应用中，生物标志物的检测不仅需要考虑其临床意义，还需要确保其在不同检测平台上的可比性和一致性。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

精准皮肤病学的发展不仅依赖于生物标志物的发现，还需要结合多组学技术和精准治疗策略。通过多组学方法，可以更全面地理解AD的发病机制和病理特征，从而为治疗选择提供更可靠的依据。例如，一些研究利用免疫分析与多组学方法的结合，成功地识别了具有不同治疗反应的患者亚群。这些亚群的识别有助于实现更个体化的治疗策略，提高治疗的有效性和安全性。

此外，随着生物标志物的不断发现和验证，精准皮肤病学的应用也在逐步扩展。例如，一些新型生物标志物，如TSLP（Thymic Stromal Lymphopoietin），已被证明与AD的发病机制密切相关。TSLP在急性期的皮损中表现出较高的水平，这可能与Th2主导的免疫反应相关。通过非侵入性的采样技术，可以更有效地获取TSLP的水平，从而为AD的诊断和治疗提供新的依据。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-13的生物制剂已被证明在中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效控制疾病的进展。此外，一些新型生物标志物，如periostin，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

精准皮肤病学的发展还需要关注患者的个体差异。例如，不同年龄、性别和种族的患者可能表现出不同的生物标志物水平，这可能与他们的遗传背景、环境因素和生活方式有关。因此，在开发和应用生物标志物时，需要考虑这些因素，以确保其在不同人群中的适用性。此外，还需要建立针对不同人群的参考区间，以提高生物标志物的诊断价值和临床实用性。

随着精准皮肤病学的不断发展，生物标志物的应用也变得更加广泛。例如，一些生物标志物不仅能够用于诊断，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-31的生物制剂已被证明在青少年中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效缓解瘙痒症状并减少皮损的进展。此外，一些新型生物标志物，如SCCA1/SCCA2，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-13的生物制剂已被证明在中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效控制疾病的进展。此外，一些新型生物标志物，如periostin，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-31的生物制剂已被证明在青少年中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效缓解瘙痒症状并减少皮损的进展。此外，一些新型生物标志物，如SCCA1/SCCA2，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

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精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-13的生物制剂已被证明在中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效控制疾病的进展。此外，一些新型生物标志物，如periostin，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

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精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-31的生物制剂已被证明在青少年中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效缓解瘙痒症状并减少皮损的进展。此外，一些新型生物标志物，如SCCA1/SCCA2，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

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精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-31的生物制剂已被证明在青少年中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效缓解瘙痒症状并减少皮损的进展。此外，一些新型生物标志物，如SCCA1/SCCA2，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

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在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

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在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-13的生物制剂已被证明在中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效控制疾病的进展。此外，一些新型生物标志物，如periostin，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-13的生物制剂已被证明在中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效控制疾病的进展。此外，一些新型生物标志物，如periostin，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物标志物检测结果准确性和可靠性的关键。此外，还需要评估生物标志物在不同患者群体中的表现，以确保其在不同人群中具有相同的诊断价值。

精准皮肤病学的发展还需要关注生物标志物的临床应用价值。例如，一些生物标志物不仅能够反映疾病的严重程度，还能用于治疗监测和预测。例如，针对IL-13的生物制剂已被证明在中重度AD患者的治疗中具有显著效果，能够有效控制疾病的进展。此外，一些新型生物标志物，如periostin，已被证明与AD的严重程度密切相关，可能成为诊断和治疗监测的重要工具。

在推动精准皮肤病学的发展过程中，还需要关注生物标志物的检测方法和分析流程。例如，基于珠子的多重免疫分析和邻近扩展蛋白质组学等技术，虽然能够提供高通量的检测结果，但其检测限和定量限可能与传统的ELISA方法存在差异。因此，建立统一的检测标准和跨平台的校准方法，是确保生物