《Clínica e Investigación en Ginecología y Obstetricia》：Laboratory diagnostic in multiple myeloma: Quantification of daratumumab blood levels using isoelectric focusing
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治疗性单抗血药浓度监测及等电聚焦技术的临床应用研究。采用标准系列和患者血清样本，通过等电聚焦（IEF）技术检测daratumumab（DmAb）浓度，发现诱导期、巩固期和维持期DmAb浓度存在显著差异，IEF为低成本高灵敏度检测方法提供新方案。
Rieke Reiter | Christoph Mann | Wolfgang Andreas Nockher
德国马尔堡大学医学院，实验室医学与病理生物化学研究所，分子诊断部门
摘要
目的
治疗性单克隆抗体（tmAb），如达拉图单抗（DmAb），是多发性骨髓瘤的主要治疗选择之一。目前用于检测血液中tmAb水平的免疫测定方法有限，尽管在出现意外临床结果时确定抗体浓度可能具有重要意义。正如先前研究所证明的，等电聚焦（IEF）技术可用于识别tmAb并将其与副蛋白区分开来。本文进一步扩展了IEF技术在tmAb浓度检测中的应用。
方法
首先，建立了一个从2.5 mg/L到0.08 mg/L的DmAb标准系列，并加入2.5 mg/L的多克隆IgG作为背景。在建立标准系列后，根据给药后时间和相应的治疗阶段，分析了患者血液样本中的DmAb浓度。
结果
给药后3至4周，DmAb浓度趋于稳定。在治疗周期内，比较诱导期、巩固期和维持期时观察到DmAb水平存在显著差异。
结论
IEF技术是评估DmAb及其它tmAb血液浓度的合适方法，尤其是在治疗反应不佳的情况下。
引言
多发性骨髓瘤（MM）是一种起源于骨髓中浆细胞的恶性肿瘤。目前，MM患者通常接受治疗性单克隆抗体（tmAb）的治疗，例如达拉图单抗（DmAb）。DmAb特异性结合CD38，这是一种II型跨膜糖蛋白，可与细胞表面的受体相互作用[1]。CD38在MM细胞上高度表达，在其他细胞上也有一定程度的表达[2]。DmAb是一种单克隆IgG Kappa抗体，可通过皮下注射（s.c.，1800 mg）或静脉注射（i.v.，16 mg/kg体重）给药[3]。
该抗体已被批准与多种药物联合使用来治疗MM[4]。在大多数治疗方案中，DmAb在诱导期每周给药一次，持续6至8周；随后在巩固期每两周或三周给药一次，持续约16周。维持期可继续进行，直到出现药物毒性或疾病进展，此期间每月给药一次DmAb。
目前，治疗期间并不常规检测DmAb水平，且可用于检测DmAb血液浓度的商业试剂较少。然而，在治疗反应异常的情况下，评估DmAb血液浓度可能具有价值。最近我们发现，等电聚焦（IEF）技术——这种在临床实验室中用于检测脑脊液和血清中寡克隆抗体的标准方法——也可用于识别MM患者体内的不同tmAb[5]。本文进一步扩展了这一方法，以实现接受治疗的患者的DmAb血液浓度的定量分析。
研究人群
本研究遵循马尔堡大学当地伦理委员会的规范（参考编号23–64 BO）进行。
从接受1800 mg DmAb皮下注射的MM或淀粉样变性患者中收集了血清和肝素血浆样本。共有65份来自24名DmAb治疗患者的样本纳入本研究。其中2名患者被诊断为淀粉样变性，22名患者被诊断为MM。大多数患者为男性。
通过IEF定量检测DmAb
由于可以使用IEF技术在患者样本中检测到tmAb[5]，我们首先分析了信号强度与抗体浓度之间的关系。DmAb的稀释系列从20 mg/L到0.04 mg/L，发现信号强度呈非线性增长。当浓度超过5 mg/L时出现了饱和效应。0.04 mg/L的浓度低于检测限（数据未显示）。
由于患者样本中的多克隆IgG浓度存在显著差异……
讨论
尽管在MM治疗过程中不常规监测tmAb水平，但在出现意外临床结果时，临床医生可能希望量化tmAb浓度。然而，由于特定免疫测定方法的有限可用性或昂贵的高效液相色谱（HPLC）/液质谱（LC-MS/MS）技术的应用，这种分析具有挑战性。我们最近引入了IEF技术作为识别和区分MM患者血液样本中tmAb和副蛋白的强大工具[5]。本文进一步改进了该技术……
研究资助
无。
CRediT作者贡献声明
Rieke Reiter：撰写 – 审稿与编辑、撰写 – 原稿撰写、数据可视化、验证、资源协调、项目管理、方法学设计、数据分析、概念构思。
Christoph Mann：撰写 – 审稿与编辑、资源协调。
Wolfgang Andreas Nockher：撰写 – 审稿与编辑、撰写 – 原稿撰写、验证、项目管理、方法学设计、概念构思。
伦理批准
马尔堡大学伦理委员会认为本研究无需审查（医学院，参考编号23–64 BO）。
利益冲突声明
作者声明没有已知的可能影响本文工作的财务利益或个人关系。
致谢
我们感谢Silke Trier对手稿的仔细校对。
