贮藏温度与时间对花生、牛奶和麸质残留物回收率的影响研究

《Journal of Food Protection》：Effect of Storage Time and Temperature on the Recovery of Peanut, Milk, and Gluten Residue from Environmental Swabs

　　本研究针对环境拭子中过敏原残留检测稳定性问题，系统评估了不同贮藏条件对花生、牛奶和麸质回收率的影响。通过对比两种ELISA试剂盒（Neogen Veratox?与Morinaga）在-20°C至37°C下0-14天的检测结果，发现低温贮藏（4°C或-20°C）可显著提高残留物回收稳定性，为食品企业环境监测样本运输与保存规范提供了关键实验依据。

　　

在食品工业中，环境拭子检测是验证清洁程序、防止过敏原交叉污染的关键手段。然而，当拭子需要送往第三方实验室检测时，运输和贮藏过程中的温度与时间波动可能影响过敏原残留物的回收率，进而导致检测结果失真。目前行业推荐同日冷链运输，但实际操作中难免遇到延误，贮藏条件对检测稳定性的影响尚不明确。这项发表于《Journal of Food Protection》的研究，由内布拉斯加大学林肯分校的Jessica Humphrey团队主导，首次系统评估了花生、牛奶和麸质三种主要过敏原在Neogen环境拭子中的回收率随贮藏温度（-20°C、4°C、室温、37°C）和时间（0-14天）的变化规律。

研究团队采用两种商业ELISA试剂盒（Neogen Veratox?系列与Morinaga系列）对比分析。通过直接接种已知浓度的过敏原提取物（花生粉、脱脂奶粉、小麦麸质）至拭子，模拟实际检测样本，并设置多时间点检测，量化回收率变化。关键实验技术包括：环境拭子过敏原残留模拟接种、多温度梯度长期贮藏实验、双品牌ELISA试剂盒平行检测、SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）蛋白稳定性分析，以及统计学差异验证（Dunnett检验）。

结果与讨论

花生残留回收率

Veratox试剂盒检测显示，花生回收率在贮藏首日即显著下降（p≤0.05），37°C贮藏14天后回收率仅剩20%。而Morinaga试剂盒结果更稳定，-20°C贮藏下回收率始终高于90%。SDS-PAGE表明花生蛋白本身稳定性高，差异主要源于试剂盒特性：Morinaga靶向热稳定性更强的Ara h 2/Ara h 6蛋白，且提取缓冲液含2-巯基乙醇（2-ME）和SDS，能复溶聚集蛋白。

牛奶残留回收率

Veratox牛奶试剂盒回收率在首日骤降，37°C贮藏14天后低于60%；Morinaga试剂盒在4°C和-20°C下回收率无显著波动。SDS-PAGE显示牛奶蛋白在室温及以上温度易聚集降解，而Morinaga试剂盒添加亚硫酸钠还原剂，有效缓解了蛋白变性带来的检测偏差。

麸质残留回收率

两种试剂盒对麸质的检测稳定性均优于花生和牛奶。Veratox试剂盒对10 ppm低浓度样本在贮藏后期出现定量下限（BLQ）问题，但中高浓度样本在-20°C贮藏下回收率保持80%以上。Morinaga试剂盒所有浓度均能稳定定量，因两者提取液均含还原剂（如2-ME或盐酸胍），有效维持麸质蛋白可检测性。

结论与意义

本研究明确证实，环境拭子贮藏温度与时间显著影响过敏原回收率，低温（4°C或-20°C）贮藏可最大限度维持检测准确性。Morinaga系列试剂盒因靶向稳定性更高的蛋白表位及强化提取缓冲液，整体表现优于Veratox系列。该成果为食品企业制定拭子运输/贮藏标准提供了实证依据，建议优先采用冷链物流并结合试剂盒特性优化检测流程。未来需扩展更多过敏原靶点、拭子类型及检测方法验证普适性。