基于CRISPR/Cas9的稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）基因敲除技术结合同源重组

《Journal of Plant Biology》：CRISPR/Cas9-Based Gene Knockout in Magnaporthe oryzae in Combination with Homologous Recombination

　　稻瘟病菌基因敲除结合同源重组与CRISPR/Cas9技术，提升编辑效率并降低验证成本，为丝状真菌遗传研究提供新策略。

　　

摘要

Magnaporthe oryzae 是引起多种作物稻瘟病的病原菌，属于子囊菌门（Ascomycota）中的丝状真菌。由于它易于在实验室中进行培养和遗传操作，因此极大地促进了对其与宿主植物之间遗传相互作用的研究。数十年来，M. oryzae 的基因敲除突变主要通过基于同源重组（HR）的方法产生，尤其是分裂标记（split-marker）技术。最近的研究表明，将 CRISPR/Cas9 与 HR 结合使用可以提高基因编辑的效率，尤其是在 HR 效率较低的情况下。此外，这种联合策略还可以减少对测序验证的依赖，从而降低整体成本。本报告描述了利用分裂标记和 CRISPR/Cas9 联合方法在 M. oryzae 中进行基因敲除的过程，包括构建设计、原生质体制备、转化以及突变体验证。同时，我们还讨论了将这种方法应用于其他丝状真菌物种的优势和前景。