一种新型紫外分光光度法用于测量动物饲料来源中蛋白质测定所需的铵离子

《Food Analytical Methods》：A Novel UV Spectrophotometric Method Measuring Ammonium Ions for Protein Determination in Animal Food Source

　　本研究开发了一种新型分光光度法用于动物源性食品中蛋白质的快速测定，通过酸消化释放铵离子并在260 nm处检测吸光度，结果与凯氏法及其他方法对比显示其准确可靠，回收率>90%，适用于多种食品样本。

　　

摘要

在生化、医学和食品领域，准确估算蛋白质含量是至关重要的。目前使用的方法——凯氏定氮法（Kjeldahl procedure）耗时较长且需要使用有害试剂；因此，寻找一种更简单、更安全、更省时的方法显得尤为重要。本研究旨在开发并验证一种新型的分光光度法，通过测量酸消化后释放的铵离子的吸光度来定量动物源性食品中的蛋白质。牛血清白蛋白（BSA）被用作标准参考蛋白。对BSA进行了酸消化处理，并使用紫外-可见分光光度法（200–800 nm）对其进行了扫描，测得其最大吸收波长（λ_max）为260 ± 1 nm。建立了用于蛋白质定量的BSA线性校准图，并将结果与凯氏定氮法及其他分光光度测定的结果进行了比较。随后将该方法应用于多种动物食品样本。实验表明，该方法在260 ± 1 nm处具有最大吸收波长，并且在包括新鲜和冷冻小牛肉、鸡肉、蛋清和蛋黄以及牛肉热狗在内的多种食品样本中实现了超过90%的蛋白质回收率。统计分析（p > 0.01）显示，该方法与凯氏定氮法及其他分光光度法之间没有显著差异。在未使用染料指示剂的情况下，通过蒸馏将消化后的蛋白质收集到三种不同的酸溶液（硼酸、盐酸和硫酸）中，最终确定主要吸收化合物为铵离子。对这些收集到的溶液进行扫描后，发现其最大吸收波长为255 ± 2 nm，这进一步证实了铵离子是主要的吸收物质，因为这些溶液仅由铵离子和酸组成。该方法为动物产品中的蛋白质定量提供了一种快速、准确且可靠的替代方案，避免了凯氏定氮法中的其他步骤，并具有相当的分析性能。