采用Dansyl氯化物衍生化技术结合UPLC-MS/MS方法，对山羊前肠中的47种二肽进行绝对定量分析并研究其分布特征

《Microchemical Journal》：Dansyl chloride derivatization coupled with UPLC-MS/MS for absolute quantification of 47 dipeptides and their profile in the foregut of goats

　　二肽在畜牧生产中的应用及LC-MS/MS定量分析方法研究，开发出基于Dansyl氯代衍生化的高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，可同时定量检测47种二肽，方法线性范围广（0.03-900 ng/mL），检出限低至0.03 ng/mL，适用于山羊瘤胃液和瓣胃液中二肽代谢研究。实验发现，以玉米-大豆日粮（CS组）和桑叶替代豆粕（MS组）饲养的山羊，其瘤胃液中Dns-Gly-Pro、Dns-Gly-Val、Dns-Phe-Ala含量显著高于瓣胃液，而MS组中Dns-Trp-Glu-OH、Dns-L-Ala-L-Leu、Dns-Leu-Leu、Dns-Tyr-Glu-OH、Dns-Val-Tyr浓度较CS组下降（P<0.05），但Dns-H-Pro-Phe-OH在MS组瓣胃液显著升高（P<0.05）。该方法为反刍动物肠道二肽代谢研究提供了高灵敏度、高特异性的分析平台。

　　在这项研究中，科学家们开发了一种高效、精确的检测方法，用于分析反刍动物胃肠道中的二肽代谢情况。二肽作为重要的小分子代谢物，不仅在细胞内信号传导、神经保护、免疫调节和抗焦虑作用等方面发挥着重要作用，还在调节牲畜生产性能和身体健康方面显示出巨大潜力。由于二肽在生物样本中的低浓度、广泛浓度范围以及其复杂性，传统的检测方法难以准确量化其含量。因此，研究团队提出了一种基于色谱柱前衍生化与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）相结合的定量分析方法，以解决这一问题。

反刍动物的瘤胃液是一种复杂的生物样本，其中含有大量的蛋白质、糖类和其他代谢物。它作为研究反刍动物健康状况和发现生物标志物的理想对象，因为其成分能够反映肠道内的代谢过程。为了准确检测47种二肽，研究团队采用了一种基于Dansyl氯化物的衍生化方法。这种方法能够提高二肽的检测灵敏度，同时确保其在液相色谱（LC）中的高效分离。通过优化LC梯度和衍生化条件，研究人员成功地实现了对这些二肽的准确定量。

为了确保检测方法的准确性，研究团队进行了方法验证，包括准确度、精密度、特异性、线性范围、线性相关系数和稳健性等参数的评估。准确度和精密度均控制在15%以内，这表明该方法在实际应用中具有较高的可靠性。同时，大多数分析物的回收率在80%到122%之间，这表明该方法能够有效提取和检测二肽。此外，大多数二肽在4°C下保存三天后仍保持稳定，这对于实际样品的处理和分析具有重要意义。

在实验中，研究人员对不同组的山羊瘤胃液和瘤胃内容物样本进行了分析。结果显示，MS组（以桑叶青贮饲料喂养）的瘤胃液中五种二肽的浓度显著低于CS组（以玉米和大豆为基础的饲料喂养），而MS组的瘤胃内容物中一种二肽的浓度显著高于CS组。这表明不同饲料对二肽的代谢和分布产生了显著影响，可能与饲料成分和肠道环境的变化有关。

此外，研究团队还探讨了不同条件对二肽检测的影响，包括衍生化试剂的浓度、反应温度、反应时间和样品处理方法等。这些优化条件确保了检测方法的稳定性和准确性，同时减少了样品处理时间。通过这种方法，研究人员能够更全面地了解二肽在反刍动物肠道中的代谢和分布情况，从而为营养策略和健康管理提供科学依据。

综上所述，这项研究开发了一种高效、准确的检测方法，能够定量分析反刍动物瘤胃液和瘤胃内容物中的二肽。该方法的建立为深入了解二肽代谢和循环机制提供了重要的工具，同时也为反刍动物的营养和健康研究提供了新的视角。通过这种方法，研究人员能够更好地理解不同饲料对二肽代谢的影响，从而为优化饲料配方和提高牲畜生产性能提供科学支持。