对拷贝数改变的初步评估证实，1号染色体长臂（1q）的扩增是局部性尤文肉瘤预后不良的独立标志物

　　Ewing sarcoma (EwS)的预后分子标志物研究显示，染色体1q增益（chr.1qG）在局部病灶患者中是独立预后不良因素，显著缩短无事件生存期（EFS）和总生存期（OS）。基因组拷贝数异常总体比例（PGA）也独立影响生存。chr.16q损失无显著预后价值。FISH和SNPa分析验证了chr.1qG的预后意义，Kaplan-Meier和Cox回归分析支持其临床应用。研究建议整合chr.1qG和PGA至临床分层模型。

　　

Ewing肉瘤（Ewing sarcoma, EwS）是一种罕见的骨与软组织恶性肿瘤，主要影响儿童及青少年。尽管已采用多模式治疗，但患者预后差异显著，传统临床风险分层仍存在局限性。为此，由欧洲多个研究机构组成的PROVABES联盟开展了一项前瞻性研究，旨在验证染色体拷贝数异常（copy number alterations, CNAs）作为新型预后生物标志物的价值。研究纳入了来自两项欧洲III期临床试验（EE99和EWING 2008）的305例EwS患者，结合FISH和SNPa技术分析基因组异常特征，并评估其对预后的影响。### 研究背景与意义

EwS的分子特征以特定染色体易位（如EWSR1::FLI1）为诊断依据，但其基因组异质性尚未被充分解析。尽管已有研究提示染色体1q gained（chr.1qG）和16q lost（chr.16qL）与不良预后相关，但多数结论基于回顾性数据，缺乏前瞻性验证。此外，传统临床参数（如年龄、肿瘤体积、治疗反应等）对预后的区分能力有限，需结合分子标记优化分层策略。### 研究方法

1. **样本收集**：研究纳入EE99（48例）和EWING 2008（257例）临床试验患者，前瞻性收集肿瘤样本及临床数据。样本经标准化处理，包括FFPE组织微阵列（TMA）和基因组DNA提取。

2. **分子检测**：

- **FISH技术**：检测chr.1qG（ZytoLight?探针）和chr.16qL（KREATECH?探针），评估≥15%的异常细胞比例作为阈值。

- **SNPa分析**：对139例样本进行全基因组拷贝数分析，识别增益或损失片段，计算基因组异常比例（PGA）。

3. **统计方法**：采用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析生存差异，单变量与多变量模型结合评估独立预后因素。### 关键研究结果

1. **chr.1qG的预后价值**：

- 在局部复发患者中，chr.1qG阳性组的中位无事件生存期（EFS）为5.33年，显著短于阴性组的8.31年（p=0.012）。多变量分析显示，chr.1qG是局部EwS患者EFS的独立预测因子（HR=3.000，95%CI 1.281–7.026）。

- 对整体队列（局部+转移性）的OS分析表明，chr.1qG阳性患者中位生存时间为5.73年，较阴性组缩短至8.74年（p=0.032），但多变量模型中该关联不再显著，提示需结合临床因素（如转移状态）综合评估。2. **chr.16qL的局限性**：

- chr.16qL在局部和整体队列中均未显示独立预后价值（p>0.05），但其与chr.1qG存在共现现象（34.3%共现），可能通过染色体不平衡机制影响肿瘤进展。3. **基因组异常负荷（PGA）的广泛影响**：

- 通过SNPa分析发现，基因组异常比例（PGA）与生存结局显著相关。局部患者中，高PGA组EFS（3.58年）和OS（6.23年）均显著劣于低PGA组（8.31年和9.87年，p<0.05）。

- 整体队列中，高PGA患者EFS（HR=2.668）和OS（HR=5.441）风险均增加，且与转移状态、CDKN2A缺失等独立相关。4. **其他CNAs的潜在价值**：

- chr.10缺失与患者死亡风险升高相关，而chr.8增益频率最高（43.9%），但未达独立预后标准。

- CDKN2A微缺失（9p21.3）在复发和死亡患者中显著富集，提示其可能作为辅助生物标志物。### 讨论与临床启示

1. **chr.1qG的生物学机制**：

- 研究发现chr.1qG与CDT2过表达相关，后者作为EWSR1-FLI1复合物的下游效应基因，可能通过激活细胞周期通路促进增殖。此外，1q扩增可能通过MDM4抑制p53活性，形成恶性循环。2. **风险分层优化**：

- chr.1qG可作为局部EwS的独立预后指标，指导高剂量化疗（如Ewing2008试验中的强化方案）的分层应用。例如，chr.1qG阳性患者可能从辅助放疗中获益更大。

- PGA作为综合指标，可整合多个CNAs的累积效应，未来或需结合AI算法建立动态评分模型。3. **技术验证与临床转化**：

- FISH技术成本较低且操作简便，适合临床常规检测。研究显示其与SNPa结果高度一致（chr.1qG检测率98.4%），验证了FISH在基层医疗机构的适用性。

- 需注意样本异质性：研究排除治疗后样本，可能低估化疗诱导的基因组异常；且 pelvic局部肿瘤（20%）中chr.1qG富集（27.3%），提示解剖位置可能影响CNAs发生。4. **未来研究方向**：

- 需扩大队列规模（尤其是转移性患者），验证chr.1qG和PGA的独立预后价值。

- 探索chr.1qG与其他分子指标（如STAG2蛋白表达、TP53突变）的交互作用，构建多维度风险模型。

- 开发基于SNPa的自动化分析工具，提高不同中心间的结果可比性。### 局限性

1. **样本局限性**：仅139例完成SNPa分析，可能遗漏亚型特异性CNAs。

2. **技术偏倚**：TMA制备可能造成异质性丢失，需结合单肿瘤测序验证。

3. **临床异质性**：欧洲多中心治疗差异（如化疗强度）可能影响结果普适性。### 结论

本研究首次前瞻性验证了chr.1qG作为局部EwS独立预后生物标志物的临床价值，并证实基因组异常负荷（PGA）对预后的广泛影响。建议将chr.1qG纳入欧洲治疗指南，指导风险分层；同时需开展多中心验证研究，优化生物标志物组合。