菲律宾棉兰老岛卡拉加地区地方性社区中鱼源性吸虫的流行情况及分子鉴定

《Food and Waterborne Parasitology》：Prevalence and molecular identification of fish-borne trematodes in endemic communities in Caraga region, Mindanao, Philippines

　　菲律宾Mindanao地区开展家庭交叉截面研究，收集1152名10-59岁居民及92只犬猫粪便样本，通过Kato-Katz显微镜检测和ITS2基因分子分析，鉴定出三种肝吸虫：Haplorchis taichui、Opisthorchis viverrini和Stellanthchasmus falcatus，发现男性及成人感染率较高，并首次在菲律宾通过分子手段确认了这些寄生虫的存在。

　　鱼源性吸虫病（Fish-borne trematodiasis）是一种由寄生性扁形动物引起的疾病，其生命周期涉及多个环节，包括淡水螺类、淡水或咸水鱼类以及包括人类在内的陆地脊椎动物宿主。这种疾病在全球范围内广泛存在，尤其是在亚洲、非洲和拉丁美洲的某些地区。在菲律宾，由于食用生鱼或未充分烹饪的鱼类在部分地区较为普遍，因此人类感染鱼源性吸虫病的情况也较为常见。然而，由于有限的流行病学研究以及诊断中的误诊问题，该疾病的真正负担和传播途径仍存在许多未知。因此，本研究旨在通过家庭为基础的横断面研究方法，调查菲律宾米沙鄢地区八个寄生虫流行社区中鱼源性吸虫病的患病率，识别其风险因素，并通过分子方法对感染的寄生虫种类进行鉴定。

### 1. 研究背景

鱼源性吸虫病是由多种寄生虫引起的，这些寄生虫通常通过摄入含有囊尾蚴的生鱼或未充分烹饪的鱼类传播。囊尾蚴是寄生虫的中间宿主阶段，它们存在于鱼体内，当人类食用这些鱼时，便可能感染。这种疾病在世界范围内影响了约700万人，尤其是在东南亚地区，包括菲律宾。由于鱼源性吸虫病在这些地区被忽视，其对公共卫生的影响往往被低估。感染可能导致多种临床症状，包括阻塞性黄疸、肝肿大，甚至严重并发症如胆管癌。此外，某些种类的鱼源性吸虫病还可能影响其他器官，如脑和心脏，导致严重的健康后果。

### 2. 研究方法

本研究作为“肠道寄生虫的动物传播”（ZooTRIP）项目的一部分，在菲律宾米沙鄢地区的阿古桑德尔苏省和苏里高德尔诺特省开展。这两个省份是土壤传播寄生虫病、血吸虫病和食源性寄生虫病的高发地区。研究选择了四个市镇，基于其寄生虫感染的高发率、地方政府的配合程度、社区的可访问性和安全状况。研究团队通过家庭为基础的抽样方法，收集了来自386个家庭的1152名年龄在10至59岁之间的居民的粪便样本，并对92只狗和猫的粪便进行了检测。为了提高检测的准确性，研究团队采用了显微镜检查和分子分析相结合的方法。

在显微镜检查中，研究团队使用了Kato-Katz方法，这是一种广泛应用于人类粪便样本中寄生虫卵检测的标准技术。对于动物样本，研究团队则采用了McMaster技术。这些技术虽然被推荐用于不同宿主的检测，但在实际应用中，它们的灵敏度有限，尤其是在区分形态相似的寄生虫种类时。因此，为了提高鉴定的准确性，研究团队还进行了分子分析，使用了内部转录间隔区2（ITS2）基因作为鉴定标记。ITS2基因因其在物种水平上的高度保守性，被认为是鉴定吸虫类寄生虫的有效工具。

### 3. 研究结果

研究结果显示，人类感染鱼源性吸虫病的总体患病率为4.1%，共有47人被检测出感染。其中，苏里高德尔诺特省的感染率较高，尤其是在Mainit和Claver市镇。相比之下，Agusan del Sur省的Trento市镇感染率较低，但仍有较高的寄生虫卵密度。值得注意的是，男性和成年人的感染率明显高于女性和儿童，这可能与他们的饮食习惯和社交行为有关。在动物样本中，仅有2只动物（均为狗）被检测出感染，这表明动物在鱼源性吸虫病的传播中可能扮演次要角色。

通过分子分析，研究团队成功鉴定了三种鱼源性吸虫病的种类：*Haplorchis taichui*、*Stellanthchasmus falcatus* 和 *Opisthorchis viverrini*。其中，*H. taichui* 是最常见的种类，主要在苏里高德尔诺特省的Mainit市镇发现。*O. viverrini* 在Agusan del Sur省的Trento市镇和苏里高德尔诺特省的Mainit市镇均有发现，而 *S. falcatus* 则主要出现在苏里高德尔诺特省的Claver和Gigaquit市镇。这些结果是菲律宾首次通过分子方法鉴定鱼源性吸虫病的种类，为后续的流行病学研究和防控措施提供了重要的数据支持。

### 4. 分析与讨论

研究结果表明，尽管总体感染率相对较低，但在某些特定地区，鱼源性吸虫病仍然存在较高的流行风险。这可能与这些地区的地理环境、渔业资源以及文化习惯有关。例如，苏里高德尔诺特省的Mainit市镇因其拥有菲律宾第四大湖泊——Mainit湖，而成为鱼类资源丰富的地区，这增加了人们接触到感染鱼类的机会。此外，某些市镇中未充分烹饪的鱼类消费较为普遍，这也可能增加了感染风险。

从社会人口学因素来看，男性和成年人的感染率明显高于女性和儿童。这可能与他们的饮食偏好和社交行为有关。例如，男性在菲律宾更倾向于与酒精一起食用生鱼，这可能与他们的社交习惯有关。同时，成年人由于长期食用生鱼或未充分烹饪的鱼类，感染风险更高。相比之下，儿童由于对生鱼的偏好较低，感染率相对较低。然而，研究团队并未发现家庭层面的教育水平、父亲或母亲的职业与感染率之间的显著关联，这可能与样本量较小或家庭中感染者的分布不均有关。

在分子鉴定方面，研究团队使用了ITS2基因作为主要的鉴定标记，这一方法在吸虫类寄生虫的鉴定中具有较高的可靠性。然而，研究也指出了一些局限性。例如，PCR技术在低寄生虫卵密度或存在抑制剂的情况下可能表现不佳。此外，某些序列的相似度低于预期，这可能反映了GenBank数据库中对某些吸虫种类参考数据的不足，或者DNA样本的降解情况。因此，未来的研究可能需要结合其他分子标记，如线粒体基因（如 *cox1* 和 *nad1*）来进一步提高物种鉴定的准确性。

### 5. 结论

本研究首次在菲律宾通过分子方法鉴定了鱼源性吸虫病的种类，揭示了该疾病在阿古桑德尔苏省和苏里高德尔诺特省农村地区的流行情况。研究结果不仅有助于填补菲律宾在鱼源性吸虫病方面的知识空白，还为制定基于证据的防控策略提供了重要依据。然而，鱼源性吸虫病的控制仍然面临诸多挑战，包括传播的复杂性、诊断的困难以及资源的限制。尽管分子技术在诊断和监测中具有重要价值，但其高昂的成本和有限的可及性使得其在农村地区的常规应用仍不现实。因此，制定适合当地情况的预防和干预措施是控制这种被忽视的热带疾病的必要步骤。

### 6. 伦理与资金支持

本研究得到了菲律宾大学马尼拉研究伦理委员会（UPMREB 2019–084-01）、菲律宾大学洛斯巴尼奥斯机构动物护理与研究委员会（CAS 2018–020）、英国萨里大学研究伦理委员会（UEC 2019 049）以及萨里大学动物福利与伦理审查委员会（OUT036）的批准。研究团队确保了所有参与者的知情同意，并为所有样本分配了唯一的代码以保护匿名性和隐私。此外，本研究得到了菲律宾科技部（DOST）和菲律宾卫生研究与发展委员会（DOST-PCHRD）以及英国医学研究委员会（MRC）的支持，其中部分资金来自NEWTON-AGHAM资助计划。这些资金支持确保了研究的顺利进行，并为后续的流行病学研究提供了基础。

### 7. 未来研究方向

未来的研究应重点关注当地食用的鱼类种类，特别是那些生食或轻度烹饪的鱼类，以及可能作为中间宿主的淡水螺类。这些研究将有助于更全面地了解鱼源性吸虫病的传播途径，并为制定有效的预防措施提供科学依据。此外，研究还应探讨不同烹饪方法对囊尾蚴存活率的影响，以及鱼类来源对感染率的潜在影响。通过对这些因素的深入研究，可以更好地指导公共卫生政策的制定，减少鱼源性吸虫病对社区的影响。

### 8. 结语

鱼源性吸虫病是一种被忽视的热带疾病，其防控工作需要多方面的努力。本研究通过家庭为基础的横断面调查，揭示了菲律宾米沙鄢地区鱼源性吸虫病的流行情况，并通过分子方法鉴定了三种主要的寄生虫种类。这些发现不仅有助于提高对鱼源性吸虫病的认识，还为制定针对性的防控策略提供了重要依据。尽管分子技术在诊断和监测中具有显著优势，但其在实际应用中的成本和可及性仍然是一个挑战。因此，未来的防控工作应结合当地的社会文化背景和资源状况，采取更加实际和有效的措施，以减少鱼源性吸虫病的传播和影响。