《GeroScience》：Necroptosis induced by MLKL overexpression in liver triggers cellular senescence and leads to chronic inflammation and fibrosis
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为破解“炎症衰老”驱动因素，编辑荐读：作者利用Alb-CreERT2/Mlkl-KI小鼠在年轻肝脏特异性诱导坏死执行蛋白MLKL过表达，发现坏死可独立于DNA损伤等经典衰老诱因，直接上调p16、p21及SASP，同步放大NF-κB炎症并启动胶原沉积，提示坏死-衰老轴是干预“inflammaging”及肝纤维化的潜在新靶点。
研究背景
慢性炎症伴随增龄被称为“炎症衰老（inflammaging）”，是驱动多器官退行性病变与死亡率的共同土壤。然而，究竟是哪些上游信号在衰老早期点燃并持续“扇风”炎症，仍是未解之谜。两大细胞命运——程序性坏死（necroptosis）与细胞衰老（cellular senescence）——均被报道随龄增加并释放促炎因子，但二者是否存在因果链条、谁因谁果，一直缺乏直接体内证据。传统老年小鼠模型常混杂DNA损伤、氧化应激等多重变量，难以厘清单一因素的贡献。于是，研究团队提出一个“减法”设想：若在年轻、低背景的小鼠肝脏里，仅人为升高坏死执行蛋白MLKL，能否就足以点燃衰老与慢性炎症，并导致纤维化？
研究设计与结论
为回答上述问题，Ramasamy Selvarani等人构建了携带Flag标签的Mlkl敲入（KI）小鼠，并与白蛋白启动子驱动的Cre-ERT2工具鼠杂交，实现2月龄时他莫昔芬（TMX）诱导后肝细胞特异性MLKL过表达（约4倍），而其余组织几乎不表达。随后持续观察至6月龄，系统评估坏死、衰老、炎症及纤维化动态。结果显示：
仅升高MLKL即可在年轻肝脏触发典型necroptosis——MLKL寡聚体增加3–4倍，血浆DAMP标志物HMGB1升高60%，ALT活性飙升8倍，TUNEL阳性细胞增多4.5倍，Ki-67增殖性修复细胞激增22倍，提示细胞死亡-再生循环被强烈启动。
坏死直接诱发细胞衰老：周期抑制因子p16与p21转录水平分别升高5倍与9倍；7种SASP组分（CXCL1、CXCL8、CXCL10、CCL2、MMP3/9/12、PAI-1及GDF-15等）一致上调，范围1.5–8.5倍，显示典型的衰老相关分泌表型。
伴随炎症爆发：肝内IL-6、IL-1β、IFN-γ显著升高；巨噬细胞（F4/80）、M1（CD68）与M2（CD206）标志全面上扬；HE切片可见每视野2–3个单核细胞簇，而对照组几乎为零。
转录组学（RNA-seq，n=6）证实420个差异基因富集于“胶原纤维组装”“胶原生物合成”及“药物代谢”通路；GSEA显示7套公开衰老基因集均呈正向趋势（NES 0.95–1.16），提示坏死足以重塑肝脏衰老相关表达谱。
早期纤维化被启动：TGF-β、Col1α1、Col3α1转录升高；α-SMA阳性肌成纤维细胞增加；天狼猩红与Masson染色分别显示胶原面积增加2.5倍与3倍，且主要沉积于门管区；偏振光下Ⅰ型（黄橙）和Ⅲ型（绿）胶原纤维同步增多，Brunt评分由0–1升至1–3，表明纤维隔膜初步形成。
关键技术方法
Alb-CreERT2/Mlkl-KI遗传模型实现肝细胞可诱导MLKL过表达；非还原Western blot检测MLKL寡聚；血浆ALT、HMGB1酶活/ELISA；TUNEL、Ki-67、α-SMA免疫组化；天狼猩红-偏振光、Masson三色组织学；RNA-seq（Illumina NextSeq 500，DESeq2差异分析，IPA通路富集）；GSEA/MSigDB衰老基因集评估。
研究结果分述
MLKL过表达在肝脏诱导程序性坏死与损伤
利用Flag标签与内源条带区分，证实TMX处理后肝组织MLKL升高约4倍，寡聚体显著积聚；伴随HMGB1、ALT、TUNEL、Ki-67同步升高，表明necroptosis-损伤-再生轴被激活。
MLKL过表达导致肝脏炎症
qPCR与形态学双重显示促炎细胞因子、巨噬细胞浸润及单核细胞簇显著增加，证明坏死本身即可在没有其他衰老应激的情况下点燃炎症。
MLKL过表达诱导细胞衰老
多重周期抑制因子（p16、p21、p19）及SASP显著上调，提示细胞衰老并非仅由DNA损伤或端粒缩短触发，单纯坏死信号亦可驱动。
MLKL过表达改变肝脏转录组
差异基因富集于胶原形成、药物代谢与炎症；多条胶原相关通路（纤维组装、链三聚化）被IPA显著激活，为后续纤维化提供分子基础。
MLKL过表达促进肝纤维化
功能与病理双重证据显示胶原沉积、肌成纤维细胞扩增及Brunt评分升高，提示坏死-炎症-衰老连续反应足可在年轻肝脏启动纤维性重塑。
研究结论与讨论
本研究首次在体证明“程序性坏死→细胞衰老→SASP持续炎症→纤维化”因果链，可在缺乏DNA损伤、氧化应激等传统衰老诱因的年轻肝脏独立运行。机制上，作者提出坏死源性DAMP（如HMGB1）通过PRR-NF-κB轴诱导邻近细胞衰老并抑制巨噬细胞清除功能，形成“衰老细胞积聚-炎症自我放大”恶性循环。该发现不仅填补了坏死与衰老之间因果关系的空白，也为“炎症衰老”提供可干预的交汇点：联合抑制necroptosis（已有Nec-1s、ponatinib等）与清除衰老细胞的“溶龄剂”策略，或能更持久地降低老年慢性炎与纤维化风险。论文发表于《GeroScience》，为老年科学及肝病干预开辟新思路。
