RIPK1非依赖性CASPASE-8存活机制在αβ T细胞中的证据

《Discovery Immunology》：Evidence for a RIPK1-independent survival mechanism for CASPASE-8 in αβ T cells

　　本研究针对CASPASE-8在T细胞稳态中的双重功能（促凋亡与抑制坏死性凋亡）展开深入探索，通过条件性基因敲除模型揭示其RIPK1非依赖性的新型促存活作用。研究人员发现，CASPASE-8缺失导致CD8+ T细胞亚群显著减少，且该表型仅部分依赖RIPK1激酶活性。研究首次证实CASPASE-8通过独立于坏死性凋亡抑制的机制维持T细胞存活，为理解免疫稳态调控提供了新视角。成果发表于《Discovery Immunology》，对自身免疫病及感染免疫治疗具有潜在意义。

　　

在免疫系统中，T细胞的存活与死亡动态平衡对维持机体防御功能至关重要。CASPASE-8（半胱天冬酶-8）作为细胞死亡通路的关键调控因子，长期以来被认为主要通过触发凋亡和抑制坏死性凋亡（necroptosis）来发挥作用。然而，其在T细胞稳态中的具体机制尚存争议：早期研究因Cre转基因毒性干扰，导致结论不一致。例如，使用Lck-Cre模型的研究报道外周T细胞严重减少，而CD4-Cre模型则显示T细胞数量正常。这种矛盾提示CASPASE-8的功能可能远超传统认知，但其在T细胞发育与存活中的精确角色仍需澄清。

为解决这一难题，研究人员在《Discovery Immunology》上发表了最新成果，通过多维度实验揭示CASPASE-8具有独立于RIPK1（受体相互作用蛋白激酶1）的新型促存活功能。研究团队利用huCD2iCre和CD8CreERT等特异性基因敲除系统，结合激酶失活RIPK1^D138N突变小鼠，系统评估了CASPASE-8缺失对T细胞各发育阶段及亚群的影响。

关键技术方法

研究采用条件性基因敲除（如huCD2iCre和CD8CreERT小鼠模型）、流式细胞术分析T细胞亚群（包括naive、中央记忆CM、效应记忆EM及虚拟记忆VM细胞）、混合骨髓嵌合体实验评估细胞竞争性存活、体外细胞死亡诱导（FASL和TNF/IKK16刺激）以及激酶失活RIPK1^D138N突变体挽救实验。所有动物实验均符合英国Home Office伦理规范（许可证PP2330953）。

研究结果

CASPASE-8表达是DP胸腺区室最佳扩增所需，但不影响SP的选择或发育

在Casp8^fx/fx huCD2iCre（Casp8△T^CD2）小鼠中，胸腺细胞总数和CD4^-CD8^-双阴性（DN）及CD4⁺CD8⁺双阳性（DP）区室均显著减少，其中DN4亚群受损最明显。然而，单阳性（SP）胸腺细胞的发育和成熟未受影响，提示CASPASE-8主要作用于早期胸腺祖细胞扩增阶段。值得注意的是，胸腺内NKT细胞（通过CD1d-α-半乳糖神经酰胺四聚体鉴定）几乎完全缺失，且该缺陷不能通过RIPK1激酶失活挽救。

CASPASE-8缺失背景下外周CD8T细胞亚群的扰动

外周CD4⁺ T细胞数量正常，但CD8⁺ T细胞区室发生显著改变：naive、CM和VM亚群数量减少，而EM亚群相对扩增。Ki67增殖分析显示，残留CD8⁺ VM细胞分裂增加，可能源于IL-15驱动的稳态代偿。此外，CASPASE-8缺失的T细胞在过继转移至野生型宿主后存活率正常，说明外周存活缺陷具有阶段性或亚群特异性。

持续CASPASE-8表达对初始T细胞存活至关重要

通过他莫昔芬诱导的CD8CreERT系统急性删除Casp8，发现成熟CD8⁺ naive和CM细胞数量在21天内减少约50%，表明部分CD8⁺ T细胞依赖持续CASPASE-8表达维持存活。这一现象不能完全归因于Cre毒性，因为EM和VM亚群的减少幅度与对照相似。

CASPASE-8缺陷T细胞在体外对TNF和FAS诱导的细胞死亡具有抗性

与野生型T细胞不同，CASPASE-8缺失的naive CD4⁺和CD8⁺ T细胞在FASL或TNF/IKK16刺激下均未发生凋亡或坏死性凋亡，提示其死亡机制非经典死亡受体通路介导。

CASPASE-8依赖性T细胞存活仅部分依赖RIPK1激酶活性

在Casp8△T^CD2 RIPK1^D138N小鼠中，胸腺DP和DN4细胞数量恢复正常，且CD8⁺ EM和CM亚群缺陷被挽救，证实坏死性凋亡参与这些过程。然而，NKT细胞缺失、CD4⁺ CM/EM及CD8⁺ VM亚群缺陷仅部分或完全不受RIPK1激酶活性影响。混合骨髓嵌合体实验进一步验证，CASPASE-8缺失细胞的竞争性劣势在naive CD4⁺/CD8⁺ T细胞中持续存在，且不能被RIPK1^D138N逆转。

结论与意义

本研究首次明确CASPASE-8在T细胞中具有独立于坏死性凋亡抑制的促存活功能。该功能对NKT细胞发育、CD8⁺ VM及CD4⁺记忆T细胞的维持至关重要，且不依赖RIPK1激酶活性。机制上，CASPASE-8可能通过酶切非经典底物或发挥支架功能（如参与NF-κB信号转导）促进细胞存活。这一发现不仅澄清了既往研究中的矛盾，还为免疫缺陷性疾病和自身免疫病的治疗提供了新靶点。例如，靶向CASPASE-8/RIPK1轴可能调控T细胞过度活化或死亡，进而改善免疫稳态失衡相关疾病预后。