基于TaqMan探针的实时PCR检测方法的开发，用于快速检测肉类中的产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和沙门氏菌属（Salmonella spp.），并评估短暂富集处理对其检测灵敏度的影响

《Food Analytical Methods》：Development of TaqMan Probe-based Real-Time PCR Assays for Rapid Detection of Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus, and Salmonella spp. in Meat and Evaluation of Effect of Brief Enrichment on Their Sensitivity

　　本研究开发并验证了实时TaqMan PCR方法用于检测肉中三种食源性致病菌（C. perfringens、S. aureus、Salmonella），灵敏度较传统PCR提升10-1000倍，证实富集培养显著提高检测限至1.2-320 CFU/g。

　　

摘要

由细菌病原体引起的食源性疾病是重大的公共卫生问题和人畜共患病问题。本研究的目的是开发实时TaqMan PCR检测方法，用于检测和定量重要的细菌性食源性疾病病原体，包括Clostridium perfringens、Staphylococcus aureus和Salmonella属细菌。为此，从目标基因的保守区域设计了引物和探针（cpa用于C. perfringens，nuc用于S. aureus，invA用于Salmonella属），并标准化了TaqMan检测方法。使用凝胶纯化的PCR扩增子进行检测时，所开发的实时TaqMan检测方法的分析灵敏度分别为：C. perfringens为2.8拷贝/μL，Salmonella属为3.5拷贝/μL，S. aureus为7.0拷贝/μL。这些TaqMan检测方法的分析灵敏度比传统的终点PCR高10至1000倍。标准曲线显示出良好的线性，所有病原体特异性TaqMan检测方法的R²值为0.99，表明这些方法可靠且可重复。在加标研究中，未富集条件下所开发的TaqMan检测方法的检测限（LoD）分别为：肉中C. perfringens为1.2×10⁵ CFU/g，Salmonella属为3.2×10⁸ CFU/g，S. aureus为3.3×10⁴ CFU/g。经过6小时的富集后，这些检测方法的LoD显著提高至肉中分别为1.2 CFU/g、320 CFU/g和3.3 CFU/g。该研究强调了在食源性疾病检测过程中富集步骤的必要性和重要性。所开发的实时TaqMan检测方法可作为快速实验室工具，用于检测和定量肉中的C. perfringens、S. aureus和Salmonella属细菌。