RAD51B-EZH2轴通过细胞命运转换成为三阴性乳腺癌潜在治疗靶点

《Cell Death & Disease》：RAD51B-EZH2 axis as a potential therapeutic target for TNBC through cell fate conversion

　　本研究针对三阴性乳腺癌(TNBC)缺乏有效治疗靶点的难题，揭示了RAD51B缺失通过AMPK/EZH2/PRC2轴介导的H3K27me3表观遗传修饰抑制ERα表达的新机制。研究发现EZH2抑制剂可逆转ERα表达并使TNBC对他莫昔芬敏感，为TNBC的靶向治疗提供了新策略。

　　

在乳腺癌的分子分型中，三阴性乳腺癌(TNBC)因其雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)的缺失表达，成为临床治疗的难点。这类肿瘤具有高侵袭性、易转移和预后差的特点，由于缺乏明确的分子靶点，患者往往只能依赖化疗，治疗效果有限。因此，探索TNBC发生发展的新机制，寻找有效的治疗靶点，成为领域内的重要科学问题。

澳门大学邓初夏团队在《Cell Death & Disease》发表的研究，通过Sleeping Beauty(SB)转座子系统的功能筛选，发现RAD51B-EZH2轴在TNBC形成中发挥关键作用，并提出了通过表观遗传重编程实现TNBC靶向治疗的新策略。

研究人员主要运用了以下关键技术：SB转座子插入突变筛选技术鉴定候选驱动基因；CRISPR-Cas9基因编辑技术构建基因敲除细胞模型；染色质免疫沉淀(ChIP)技术分析组蛋白修饰和PRC2复合物募集；患者来源类器官(PDO)平台进行药物敏感性测试；以及三维肿瘤切片培养(3D-TSC)系统评估药物疗效。

3.1. RAD51B功能缺失是TNBC形成的致癌驱动因子

通过分析Brca1条件性敲除和Fgfr2突变小鼠模型中产生的TNBC肿瘤，研究人员筛选出64个重叠的候选驱动基因。利用荧光素酶报告系统筛选发现，RAD51B敲除对ERα、PR和HER2报告基因活性抑制最显著。临床数据分析显示，RAD51B低表达与基底样乳腺癌患者不良预后相关。

3.2. RAD51B是肿瘤发生过程中ERα表达所必需的

在HP5008细胞中敲除Rad51b可下调ERα表达，促进肿瘤生长并增加TNBC表型比例。诱导性Rad51b敲除实验表明，RAD51B缺失可加速ERα阳性向阴性表型的转换。临床样本分析证实RAD51B与ERα表达呈正相关。

3.3. RAD51B缺失诱导Esr1启动子区域组蛋白H3K27三甲基化

RNA-seq分析显示Rad51b敲除后多数差异表达基因下调。Western blot和免疫荧光证实RAD51B缺失可增强抑制性组蛋白标记H3K27me3和H3K9me3。ChIP实验表明H3K27me3在ERα启动子区域富集显著增加。

3.4. RAD51B缺失增加PRC2向Esr1启动子区域的募集

GSEA分析显示EZH2靶基因在Rad51b敲除后下调。ChIP实验证实EZH2和SUZ12在ERα启动子区域募集增加。同时敲除Ezh2、Suz12或Aebp2可逆转Rad51b缺失导致的ERα表达抑制。

3.5. RAD51B缺失通过AMPK通路导致EZH2 Thr311去磷酸化

机制研究表明，RAD51B缺失可提高细胞ATP水平，抑制AMPK活性，降低EZH2 Thr311位点磷酸化，从而增强PRC2复合物活性。AMPK激动剂Antimycin A处理可逆转这一效应。

3.6. 抑制EZH2活性逆转ERα表达并使肿瘤对内分泌治疗敏感

EZH2抑制剂EPZ6438和GSK343处理可逆转Rad51b缺失导致的ERα表达抑制。在3D肿瘤切片和动物模型中，EZH2抑制剂与他莫昔芬联用显示出协同抗肿瘤效果。

3.7. 靶向EZH2赋予ERα阴性乳腺癌抗雌激素敏感性

在多种TNBC细胞系中，EZH2抑制剂可重新激活ERα表达并增强对他莫昔芬的敏感性。患者来源类器官实验证实，低剂量EZH2抑制剂与他莫昔芬联用可显著抑制多种亚型乳腺癌生长。

该研究首次揭示了RAD51B通过调控细胞能量代谢-AMPK-EZH2磷酸化轴，影响PRC2复合物活性，进而表观遗传调控ERα表达的新机制。更重要的是，研究证明通过EZH2抑制剂可实现TNBC的"细胞命运转换"，使其重新获得对内分泌治疗的反应性，为TNBC的临床治疗提供了新的联合治疗策略。这一发现不仅深化了对TNBC表型可塑性的理解，也为开发针对表观遗传重编程的联合疗法奠定了理论基础。