《Natural Products and Bioprospecting》：Preparation, physicochemical properties, and immunomodulatory activity of glycoproteins from Syngnathoides biaculeatus
编辑推荐：
为破解“海龙”免疫增效物质不明之谜，研究者以热水提取-柱层析纯化获得糖蛋白SYB-1，证实其经AA-COX/ CYP450/ anandamide多通路调控NO、TNF-α、IL-6释放，为开发海洋来源免疫营养补充剂提供新证据。
“海龙”在民间已沿用六百年，被视为提升精气神、止咳平喘的“海洋人参”，却长期像黑箱——人们知其能“补”，却不知究竟谁在“补”。蛋白、多糖、小分子各说各话，活性成分像散落的珍珠，缺一条串起的线。更尴尬的是，海龙干品58.9%是粗蛋白，可真正溶于水、能被肠道吸收且直接对话免疫系统的物质，一直躲在“盲区”。当后疫情时代把“吃对食物、调好免疫”推向热搜，科学家必须回答：海龙里有没有精准可量化的“免疫开关”？若有，它的化学长相、分子靶点和调控逻辑又是什么？
带着这些疑问，Xia Xuewei等把目光锁定在“水溶性糖蛋白”——既能保留蛋白活性，又带糖链“天线”，可高效识别免疫细胞表面受体。研究团队先以单因素-正交试验破解热水提取“密码”：100°C、2.5h、料液比1:20、乙醇终浓度85%时，粗糖蛋白SYB得率最高。随后用DEAE-52与Sephadex G-200双柱纯化，得到均一组分SYB-1，像把“散珍珠”串成“项链”，为后续功能解析奠定基础。
关键技术方法：热水提取-乙醇沉淀制备粗糖蛋白；DEAE-纤维素与Sephadex G-200柱层析纯化；HPGPC测定分子量；GC-MS、氨基酸分析仪、FT-IR、NMR解析结构；CCK-8与中性红吞噬评价巨噬细胞RAW264.7活性；Griess法及ELISA检测NO、TNF-α、IL-6；UPLC-QTOF-MS代谢组学，结合KEGG通路富集与DAMs-gene网络分析。
研究结果
制备与理化性质
SYB-1分子量9.423kDa，糖含量8.46%（甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.00:1.34:2.09），蛋白部分以甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬氨酸为主，总氨基酸88.81%。β-消除反应与NMR提示存在O-GalNAc/O-GlcNAc型O-糖肽键，FT-IR显示同时含酰胺Ⅰ、Ⅱ带及吡喃糖苷特征峰，证实为酸性O-糖蛋白。
免疫调节活性
在≤600μg/mL范围内，SYB与SYB-1均无毒，反使RAW264.7存活率提升。SYB-1在120μg/mL即可显著促进NO、TNF-α、IL-6释放，效果优于粗品，提示纯化“去杂留真”后活性更集中。
代谢组学机制
SYB-1处理组 vs 对照组共筛出71种差异代谢物（DAMs）。最显著变化的通路与花生四烯酸（AA）代谢相关：
COX通路：稳定代谢产物6-keto-PGF（PGI surrogate）及PGF显著上调，提示SYB-1增强前列腺素合成，可能借助COX-2/PTGS2；
CYP450通路：抗炎介质11,12-EET被显著下调，伴随CYP2J2可能抑制或sEH活性升高，方向偏向促炎；
anandamide通路：内源性大麻酰胺类似物Docosatetraenoylethanolamide（DEA）下调，反映AA更多流向COX分支。
DAMs-gene网络显示CYP1B1、CYP3A5、CYP4A11、CYP4A22及PTGS2为高度连接节点，被推测是SYB-1调控AA代谢的“分子旋钮”。
结论与讨论
该研究首次把海龙功效从“经验”推进到“精准分子”——一条9.4kDa的O-糖蛋白SYB-1，通过COX-前列腺素、CYP450-表氧化三烯酸及内源性大麻酰胺三条AA代谢支路，双向调节巨噬细胞免疫介质释放。它既像“油门”提升NO、TNF-α、IL-6，又通过PGI代谢物设置“保险”，避免过度炎症。作者指出，SYB-1可成为免疫低下人群的营养补充候选，也为开发海洋生物来源的“免疫精准调节剂”提供新靶点（PTGS2、CYP450家族）。未来只需在受体水平（TLR/CLR）和体内模型进一步验证，这条“珍珠项链”便可真正戴到临床和功能性食品的“脖子”上。
