GITR触发对HIV特异性CD8+T细胞功能影响有限但可增强潜伏感染CD4+T细胞的HIV转录逆转

《Scientific Reports》：GITR triggering has limited impact on HIV-specific CD8 T-cell function but enhances HIV transcription reactivation from latently infected CD4 T-cells

　　本研究聚焦HIV免疫治疗新靶点GITR（糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白），通过系统分析HIV感染者T细胞中GITR的表达模式，发现其与病毒控制相关；进一步利用六聚体GITR配体（GITRL）进行功能验证，证实其虽对CD8+T细胞抗病毒功能增强有限，但能特异性激活NF-κB通路并逆转HIV潜伏转录，且不扩大病毒储存库规模，为“休克与杀死”策略提供了新型潜伏逆转剂（LRA）的研发思路。

　　

人类免疫缺陷病毒（HIV）感染至今仍是全球重大公共卫生挑战。尽管抗逆转录病毒治疗（ART）能有效抑制病毒复制，但因其无法清除整合在宿主基因组中的潜伏病毒储存库，患者需终身服药。潜伏感染的CD4⁺T细胞（CD4TCs）是病毒储存库的主要组成部分，其存在的根本原因在于HIV可进入转录静默状态。为实现HIV的根治，科研人员提出了“休克与杀死”（Shock and Kill）策略：即通过潜伏逆转剂（LRA）重新激活病毒转录，再借助免疫系统清除被激活的感染细胞。然而，现有LRA存在激活效率低、脱靶效应强等问题，且HIV特异性CD8⁺T细胞（CD8TCs）在慢性感染状态下功能耗竭，难以有效清除病毒。因此，开发能同时增强T细胞功能并安全有效逆转潜伏的新型免疫调节剂成为当前研究的热点。

糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白（GITR）是肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRSF）成员，在T细胞活化、增殖及效应功能中发挥关键共刺激作用。近期研究发现GITR可能成为HIV免疫治疗的新靶点，但其在HIV感染者中的表达模式及功能研究仍较薄弱。为此，阿根廷布宜诺斯艾利斯大学生物医学研究所的Alejandro Czernikier团队在《Scientific Reports》上发表论文，系统探讨了GITR在HIV感染中的免疫调节作用与治疗潜力。

研究团队通过多色流式细胞术分析了接受ART治疗（On-ART）与未接受治疗（Off-ART）的HIV感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中GITR的表达特征；利用六聚体GITR配体（GITRL）刺激模型，评估了其对HIV特异性CD8TCs功能的影响；并通过体外潜伏逆转实验，检测了GITRL对病毒转录的激活作用。关键技术方法包括：肽库刺激后的免疫表型分析、细胞内细胞因子染色与脱颗粒检测、VITAL杀伤实验、CFSE增殖测定、HIV总DNA与未剪接RNA（US-RNA）定量等。

GITR在HIV感染者T细胞中的表达特征与病毒控制相关

研究首先发现，在Off-ART组中，HIV特异性CD8TCs经肽刺激后GITR表达显著高于总CD8TCs，且以中央记忆（CM）和效应记忆（EM）表型为主。其中GITR⁺EM细胞比例与病毒载量（VL）呈负相关，而与CD4/CD8比值正相关。在CD4TCs中，调节性T细胞（Tregs）的GITR表达水平最高，且其CM与EM亚群中GITR⁺细胞比例也与VL负相关。在On-ART组中，GITR表达模式类似，但HIV特异性CD8TCs中GITR与4-1BB共表达增多，而PD-1表达下降，提示长期ART可能改变共刺激分子表达格局。这些结果表明GITR表达与免疫控制指标密切相关，尤其效应记忆T细胞可能是其作用的主要载体。

GITRL可短期增强CD8TCs功能但长期细胞毒性未改善

通过剂量依赖性结合实验证实六聚体GITRL能特异性结合活化T细胞表面的GITR。短期（4天）GITRL共刺激可显著提升HIV特异性CD8TCs的IFN-γ分泌与CD107a/b脱颗粒水平，但延长刺激至14天后，其增殖能力与细胞毒性（VITAL实验）未见增强。说明GITRL虽能短暂改善CD8TCs功能，但不足以逆转长期耗竭状态，需联合其他免疫调节策略。

GITRL促进CD4TCs增殖但不扩大病毒储存库

在CD4TCs中，GITRL共刺激可显著增强亚优化PHA诱导的增殖反应，但HIV总DNA检测显示病毒储存库规模未发生显著变化，说明GITRL驱动的增殖并未优先扩增含病毒DNA的细胞，避免了储存库的意外扩增。

GITRL通过NF-κB通路显著逆转HIV潜伏

研究最关键的发现在于，GITRL共刺激可使HIV未剪接RNA（US-RNA）水平提升4.16倍，且效果优于单用亚优化PMA。由于GITR信号可激活NF-κB通路（HIV转录的关键调控因子），该结果首次证明GITR触发具有潜伏逆转活性，且不引发全局T细胞活化相关的安全风险。

本研究系统阐明了GITR在HIV特异性免疫应答中的表达规律与功能特性，突破性发现GITRL可作为新型潜伏逆转剂，在转录水平有效激活潜伏病毒且不扩大储存库。尽管其对CD8TCs的功能增强作用有限，但GITRL与其他LRA或治疗性疫苗联用，有望在“休克与杀死”策略中发挥协同作用。该研究为HIV治愈策略提供了新的靶点与实验依据，凸显了共刺激通路调控在免疫治疗中的潜力。