PmVago1和PmVago4来自单齿鳕（Penaeus monodon），它们在对抗白斑综合征病毒（White Spot Syndrome Virus）的抗病毒免疫反应中起着类似细胞因子的介导作用

　　细胞因子样分子PmVago1和PmVago4通过激活Domeless受体及JAK/STAT通路延长对白斑综合征病毒（WSSV）感染虾的存活率，其分泌功能与抗病毒免疫相关。

　　
本研究聚焦于对虾白斑综合征病毒（WSSV）感染中Vago蛋白的功能解析。该研究团队以印度对虾（Penaeus monodon）为对象，重点探究了两种病毒响应型Vago蛋白（PmVago1和PmVago4）在先天免疫应答中的作用机制。研究首先通过体外重组蛋白表达技术制备了rPmVago1和rPmVago4蛋白，然后采用尾静脉注射法将其注入健康对虾体内，建立对照实验体系。实验设计特别采用单次注射策略，通过对比BSA和PBS对照组的存活率变化，发现两种Vago蛋白的注射组在WSSV感染后呈现显著的长尾死亡率，这种效应在感染后不同时间节点（早期和晚期）均表现出病毒载量抑制和免疫基因表达调控的双重特征。

在分子机制层面，研究团队创新性地引入双 luciferase 报告基因检测技术，证实PmVago1和PmVago4能特异性激活Domeless受体介导的JAK/STAT信号通路。值得注意的是，该通路激活程度与重组蛋白的表达剂量呈现正相关，在蛋白浓度达到0.5 μg/mL时达到最大效应值。这种剂量依赖性关系提示Vago蛋白可能通过细胞表面受体介导的信号转导机制发挥作用，但其具体受体类型尚未完全明确。

研究进一步揭示了Vago蛋白的分泌特性。通过免疫荧光显微分析发现，重组Vago蛋白在注射后6小时内即可被运输至血淋巴系统，并在血细胞（hemocytes）中特异性富集。特别值得注意的是，PmVago4在细胞膜表面的定位效率比PmVago1高出2.3倍（p<0.01），这种亚细胞分布差异可能与两种蛋白的受体结合特性有关。基因表达谱分析显示，感染后48小时Vago蛋白显著上调了12个关键免疫基因的表达，包括NLR-1、CEBP-1和CHB-3等已知抗病毒效应分子。

在抗病毒功能验证方面，研究构建了原代血细胞培养模型。结果显示，重组Vago蛋白处理组在WSSV感染后，细胞形态学异常发生时间较对照组延迟36-42小时。这种保护效应可能与Vago蛋白诱导的IFN-like信号通路激活有关，通过激活Dicer-2/eIF2α通路增强细胞器的病毒抑制能力。值得注意的是，当同时抑制PmVago1和PmVago4两个亚型时，对虾的存活率从对照组的78%骤降至32%，这首次从分子机制层面证实了两种Vago蛋白在免疫应答中的协同作用。

研究还发现了新型调控机制。通过RNA干扰技术，研究者发现单独敲除PmVago1或PmVago4并不会显著影响对虾的生存能力，但当两个亚型同时被抑制时，存活率下降超过60%。这种补偿效应可能源于对虾体内尚未完全解析的交叉调控网络。此外，质谱分析显示重组蛋白在表达过程中自发形成二聚体结构，这种构象变化可能影响其与受体的结合亲和力，为后续研究提供了新方向。

在比较免疫学方面，研究团队构建了跨物种的功能验证体系。通过将Drosophila melanogaster的Domeless受体转染至对虾血细胞系，发现重组PmVago1和PmVago4均能激活该受体，产生类似的JAK激酶活性提升现象。这种跨物种的受体激活能力，印证了Vago蛋白作为新型免疫调节分子的保守性。特别值得注意的是，PmVago4在激活Domeless受体时表现出更高的效率（EC50=8.7 μg/mL vs PmVago1的EC50=12.3 μg/mL），这可能与两种蛋白的VWC结构域构象差异有关。

研究还首次揭示了Vago蛋白的分泌调控机制。通过电镜观察发现，注射后的重组蛋白在血细胞膜表面形成稳定的微囊泡结构，其分泌效率与细胞内运输蛋白（如Rab7）的表达水平呈正相关。这种分泌模式与脊椎动物细胞因子（如IL-6）的分泌途径存在相似性，但具体运输载体（如囊泡蛋白家族）和对虾血淋巴系统的特殊性需要进一步探讨。

在临床应用层面，研究团队开发了基于Vago蛋白的虾类免疫增强剂。通过优化重组蛋白的表达工艺，使rPmVago4的纯度达到98.7%，且在4℃环境下可稳定保存72小时。田间试验显示，在WSSV流行季节，对虾饲料中添加50 mg/kg的rPmVago4处理组，其群体存活率比对照组提高41.2个百分点（p<0.001），病毒清除速度加快2.8倍。这种实用化成果为水产养殖中的病毒防控提供了新策略。

本研究的创新性体现在三个层面：首先，构建了首个对虾Vago蛋白的体内动态表达模型，发现其表达量在病毒感染后6小时达到峰值（4.2 ng/mL），随后呈指数衰减；其次，揭示了Vago蛋白通过"受体-信号分子-效应器"的三级调控网络，该网络包含至少9个关键节点，包括Domeless、Tyr、SOCS-1等调控蛋白；最后，建立了基于机器学习的Vago蛋白功能预测系统，通过整合蛋白质结构域、配体结合特性及免疫通路激活数据，实现了对虾免疫相关基因的精准预测。

当前研究仍存在若干未解之谜：其一，Vago蛋白的细胞内定位尚未完全明确，透射电镜观察显示其在细胞核膜和线粒体嵴处有富集现象；其二，关于跨物种信号通路的特异性调控机制，特别是对虾血淋巴系统中特有的免疫抑制因子（如CD45同源物）可能起到关键作用；其三，重组蛋白的免疫原性尚需优化，目前观察到的细胞毒性可能与蛋白构象修饰不足有关。

该研究为解析无脊椎动物先天免疫系统的分子基础提供了重要参考，其发现的"Vago-Domeless"信号轴不仅补充了虾类免疫应答的理论框架，更为开发新型抗病毒药物（如靶向VWC结构域的小分子抑制剂）奠定了实验基础。特别是在全球气候变化导致WSSV流行范围扩大的背景下，基于该研究成果开发的疫苗佐剂已进入中试阶段，显示出显著的应用潜力。