基于分析质量源于设计(AQbD)的环保型稳定性指示RP-UPLC方法开发及其在Tovorafenib分析中的应用研究

《Scientific Reports》：Eco-conscious AQbD-guided stability-indicating RP-UPLC method for analysing Tovorafenib in bulk and dosage forms

　　语 本研究针对新型RAF抑制剂Tovorafenib（TRN）缺乏绿色分析方法的现状，融合分析质量源于设计(AQbD)与绿色分析化学(GAC)理念，开发了一种快速、环保的稳定性指示RP-UPLC方法。通过优化色谱条件（0.01N Na2HPO4-甲醇为流动相，流速0.29 mL/min），实现在3分钟内完成TRN定量分析，方法验证显示优异线性（r2=0.9997）与精密度（%RSD<0.5%）。强制降解实验证实方法可有效分离降解产物，绿色度评估工具（AGREE 0.61、BAGI 70等）凸显其环境友好性，为儿科脑胶质瘤药物质量控制提供了可持续分析方案。

　　

论文解读

在儿童低级别胶质瘤(pLGG)的治疗领域，BRAF基因突变（如融合或V600E突变）是重要的治疗靶点。Tovorafenib（TRN）作为一款II型RAF抑制剂，因其卓越的中枢神经系统渗透能力且不会引发I型抑制剂常见的MAPK通路异常激活问题，于近期获得美国FDA批准，用于6个月以上复发或难治性pLGG患儿的治疗。这一突破性进展凸显了TRN在儿科神经肿瘤领域的临床价值。然而，随着TRN进入临床应用，对其在药品质量和治疗监测中的分析需求日益迫切。传统色谱分析方法常依赖高毒性有机溶剂，不仅对环境造成负担，也可能对操作人员健康产生潜在风险。在此背景下，如何开发既满足严格法规要求（如ICH Q2(R1)验证标准），又符合绿色可持续理念的分析方法，成为药物分析领域亟待解决的关键问题。

本研究创新性地将分析质量源于设计(AQbD)框架与绿色分析化学(GAC)原则相融合，旨在建立一种快速、精准且环境友好的反相超高效液相色谱(RP-UPLC)方法，用于TRN原料药及制剂的质量控制。通过系统性优化色谱参数并采用中央复合设计(CCD)等统计工具，团队成功构建了在3分钟内完成TRN分析的高效平台，为儿科抗癌药物的绿色分析实践树立了新标杆。

关键技术方法概要

研究采用Waters Acquity UPLC系统，配备BEH C₁₈色谱柱（100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm）及PDA检测器。以0.01N Na₂HPO₄水溶液-甲醇（62:38, v/v）为等度洗脱流动相，流速0.29 mL/min，检测波长292 nm。通过AQbD指导的实验设计优化流动相组成、流速和柱温等关键参数，并对方法进行全验证（包括线性、精度、特异性等）。强制降解实验参照ICH Q1A(R2)/Q1B指南，使用TRN原料药及市售片剂（OJEMDA^?100 mg）评估药物稳定性。绿色度采用AGREE、BAGI等6种工具综合评价。

研究结果

1. 方法优化与验证

通过响应面法确定最优色谱条件：流动相比例62:38、流速0.29 mL/min、柱温27.5°C，此时TRN保留时间为1.484分钟，理论塔板数2308，拖尾因子1.245。验证结果显示方法线性范围10-60 μg/mL（r²=0.9997），检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.14 μg/mL和0.44 μg/mL。日内与日间精密度%RSD均低于0.5%，回收率99.92%，符合ICH标准。

2. 强制降解与稳定性

酸降解（2N HCl，60°C）导致TRN降解7.76%，碱降解（2N NaOH）和氧化降解（20% H₂O₂）分别产生4.63%和4.46%降解物，而光解和热降解影响较小（<2%）。色谱图显示降解产物与TRN主峰分离良好，证明方法具稳定性指示能力。样品溶液在4°C下可稳定保存48小时。

3. 绿色度综合评价

多种评估工具一致确认方法的环境优势：AGREE得分0.61（满分1.0），BAGI实用性指数70分，RAPI分析性能指数92.5分。甲醇替代乙腈作为流动相、低溶剂消耗（每针仅0.87 mL）和短分析周期是主要绿色特征。RGBfast模型显示红（分析性能）、绿（环境友好）、蓝（实用性）均衡得分50，整体“白度”表现突出。

结论与意义

本研究成功构建了首个整合AQbD与GAC的TRN分析平台，在3分钟内实现精准定量，显著提升了分析效率。强制降解研究揭示了TRN在酸性条件下的不稳定性，为制剂工艺优化提供关键数据。方法绿色度评估通过多维度工具验证，为药物分析领域践行可持续发展原则提供了可量化范本。该工作不仅满足了TRN临床应用的质控需求，更通过方法论创新推动了分析科学向“绿色化”与“智能化”的转型，对儿科肿瘤药物的精准治疗保障具有积极意义。