阐明CKD相关血管钙化中p38抑制作用及蛋白质限制效应的具体机制

《ASN Publications》：Clarifying On-Target p38 Inhibition and Protein Restriction Effects in CKD-Associated Vascular Calcification

　　血管钙化机制研究中，5/6肾切除术联合高磷低蛋白饮食模型通过整合组织学、μCT和转录组学为p38 MAPK提供了潜在靶点，但需优化药理学特异性、验证营养协同效应及完善实验设计。

　　

我们非常感兴趣地阅读了Jin等人最近发表在《JASN》上的研究，该研究将5/6肾切除术与高磷/低蛋白饮食相结合，以模拟中动脉和皮肤小动脉的钙化现象，并指出p38 MAPK是一个可行的治疗靶点。¹ 这项研究快速且可重复地观察到了相关表型，并整合了组织学、微CT和转录组学数据，这一点值得称赞，为机制研究和转化医学应用奠定了坚实的基础。然而，为更好地理解研究结论，还需要考虑几个方法学问题。

首先，应增强药物作用的特异性。尽管SB203580被广泛使用，但它主要抑制p38α/β亚型，对p38γ/δ亚型的抑制作用有限，并且在实验浓度下还会对其他激酶产生抑制作用。² 因此，我们建议用化学结构不同的p38抑制剂（例如BIRB-796 [doramapimod]、GW856553 [losmapimod]和PH-797804）来替代SB203580，以验证这种表型的可重复性。鉴于p38α（Mapk14）在血管平滑肌中占主导地位，并且其敲低能够抑制磷酸盐诱导的钙化，我们建议使用特异性针对血管平滑肌的、由他莫昔芬诱导的p38α基因敲除小鼠（SM22α-CreERT2; Mapk14fl/fl），并在高磷饮食（HPi–Lp）和5/6肾切除术（Nx）条件下进行遗传验证。

其次，研究中并未直接验证营养不良和高磷血症是否具有协同作用从而加剧钙化。作者指出，营养不良可能通过减少钙化抑制因子（如fetuin-A和基质Gla蛋白）间接促进血管钙化。³ 但目前仅测量了主动脉中的fetuin-A和基质Gla蛋白水平，而没有根据饮食情况对血清指标进行分层分析。我们建议采用等热量喂养或补充必需氨基酸的方法，以区分蛋白质效应与能量缺乏的影响。此外，我们建议在诱导期连续检测血清中的fetuin-A水平和钙磷乘积（Ca×P），并与血管钙含量的定量数据同步分析，从而明确循环抑制因子和矿物质平衡的变化与组织矿物质沉积之间的关系。另外，通过补充外源性fetuin-A的实验可以直接验证在高磷环境下营养不良与fetuin-A轴之间的可逆性。

第三，由于仅使用了雄性C57BL/6J小鼠且暴露时间仅为4周（未能观察到典型的皮肤坏死和疼痛症状），该研究的普适性受到限制。由于性别会影响矿物质代谢和血管重塑，纳入雌性小鼠并延长观察时间将提高研究的转化医学价值。⁴

总之，HPi–Lp 5/6肾切除术模型为机制研究和临床前测试提供了一个实用的平台。明确蛋白质限制的独立作用，并严格证实p38作为致病因素的地位，将显著增强该研究的转化医学意义。