非病毒工程 CARCIK-CD19 细胞治疗异基因移植后复发急性淋巴细胞白血病：安全且持久缓解的新希望

　　为解决 CAR-T 细胞疗法成本高、生产受限等问题，研究人员开展了利用睡美人（SB）转座子工程化供体来源的抗 CD19.CD28.OX40.CD3ζ T 细胞（CAR_CIK-CD19）治疗异基因造血干细胞移植（alloHSCT）后复发的 B 细胞前体急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）的研究。结果显示该疗法安全且能诱导缓解，为相关治疗提供新方向。

娑撹桨绨℃穱鍐箻缁夋垵顒熼惃鍕炊閹绢叏绱濋悽鐔哄⒖闁岸鍣伴梿鍡曠啊鏉╂瑧鐦掗弬鍥╃彿閿涘苯顩ч棁鈧懟杈ㄦ瀮閸樼喐鏋冮敍宀冾嚞閻愮懓鍤敍锟�鐠併垽妲凚ioHot缁便垹褰囬崢鐔告瀮

　　在癌症治疗领域，白血病一直是严重威胁人类健康的疾病。急性淋巴细胞白血病（ALL）作为白血病的一种，给患者带来了极大痛苦。目前，嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）疗法虽在 ALL 治疗中展现出一定潜力，但面临诸多挑战。传统的 FDA/EMA 批准的 CAR-T 细胞疗法通过病毒载体对患者来源的细胞进行基因工程改造，在中心化制造设施中生产。然而，病毒载体的使用使得生产过程受到严格监管，需要专门的生物安全 2 级制造设施，成本高昂且生产周期长。此外，患者来源的细胞产品在获取目标细胞剂量时困难重重，尤其是晚期患者，他们往往淋巴细胞耗竭且血液中存在循环原始细胞。在这样的背景下，开展新的研究以寻找更有效、更经济且更易获取的治疗方法迫在眉睫。

意大利的研究人员针对上述问题展开了深入研究。他们利用睡美人（SB）转座子对供体来源的抗 CD19.CD28.OX40.CD3ζ T 细胞（CAR_CIK-CD19）进行工程化改造，用于治疗异基因造血干细胞移植（alloHSCT）后复发的 B 细胞前体急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）患者，并取得了重要成果。该研究成果发表在《Blood Cancer Journal》上，为白血病治疗带来了新的希望。

下载安捷伦免疫疗法应用报告《线粒体代谢是慢性淋巴细胞白血病 CAR T 细胞疗效的关键指标》妫帮拷 閸欙拷

研究人员在这项研究中主要运用了以下关键技术方法：首先是细胞工程技术，通过电穿孔将表达 CD19 第三代 CAR 的 SB 质粒导入细胞，从而获得 CAR_CIK-CD19 细胞；其次是采用特定的细胞来源，选取之前移植供体的 50ml 外周血作为细胞源；最后是运用整合位点（IS）分析技术，通过基于超声处理的连接介导（SLiM）-PCR 方法，对基因组 DNA 进行分析，评估 SB 工程的生物安全性 。

研究结果

楠炲灝鎲� 下载《研究应用指南：利用转录组学提高疗法开发的成功率》发现药物开发的新视角，您将了解到单细胞和空间分析取得突破的应用案例：

1. 产品和患者特征：从 2019 年 2 月至 2023 年 12 月，36 例 alloHSCT 后复发或难治的 BCP-ALL 患者接受了 CAR_CIK-CD19 细胞治疗。CAR-T 细胞由之前移植供体的外周血通过电穿孔转染 SB 质粒制备，成功为所有患者生产出细胞产品。最终细胞产品中 CD3⁺细胞占比高，平均转导效率为 33.5%。患者中位年龄 39 岁，多数患者接受过多种先前治疗，部分患者存在费城染色体阳性、髓外疾病等情况 。
2. 治疗安全性：细胞因子释放综合征（CRS）发生在 15 例患者（42%）中，均为 1 - 2 级，通过相应治疗后缓解。仅 1 例患者出现 2 级免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS），2 例患者出现 3 级迟发性外周神经病变。治疗后未发生移植物抗宿主病（GVHD），但部分患者出现感染并发症以及 3 级及以上的中性粒细胞减少和血小板减少 。
3. 治疗疗效：30 例患者（83%）达到总体缓解率（ORR），24 例可评估患者中 86% 实现微小残留病（MRD）阴性或阳性不可定量（PNQ）的完全缓解（CR）。患者 1 年总生存率（OS）为 57.0%，无事件生存率（EFS）为 32.0%，缓解持续时间（DOR）中位数为 8.1 个月，1 年 DOR 为 38.6%。此外，发现骨髓原始细胞水平与预后相关，前期接受 1 次 alloHSCT 且淋巴细胞清除后骨髓原始细胞水平 < 5% 的患者预后更好 。
4. CAR-T 细胞特性：所有患者均观察到 CAR-T 细胞扩增，中位峰值扩增为 38.1 个细胞 /μl，中位达峰时间为 10 天。CAR-T 细胞扩增与 CRS 发生相关，且在体内持续存在时间长，部分患者可检测到超过 2 年。同时，CAR-T 细胞可控制健康 B 细胞祖细胞的出现，维持 B 细胞发育不全，但部分患者在治疗后 3 - 6 个月出现 B 细胞恢复 。
5. 整合位点分析：对 15 例患者进行 IS 分析，结果显示 SB 转座子在基因组中的插入无偏好性，未发现对基因密集区域、转录起始位点和启动子区域的偏好。体外转导的 CAR_CIK-CD19 细胞具有高度多克隆性，输注后未观察到克隆优势，表明 SB 工程化的 CAR-T 细胞具有良好的生物安全性 。

研究结论与讨论

这项研究表明，使用 SB 转座子工程化的供体来源 CAR_CIK-CD19 细胞治疗 alloHSCT 后复发的 BCP-ALL 患者具有良好的安全性和有效性。该疗法可诱导长期缓解，即使在高疾病负担的患者中也具有可管理的毒性。与其他 CAR-T 细胞产品相比，其细胞因子升高水平较低，但 CAR-T 细胞的扩增和持久性相似。尽管研究中患者具有高难治性疾病特征，但 CAR_CIK-CD19 仍显示出较高的治疗潜力，与其他已获批的 CAR-T 细胞产品疗效相当，且在髓外疾病患者中也观察到了响应。此外，研究还发现序贯给予双抗原靶向治疗可能提高总体响应率。同时，研究证实了 SB 转座子在临床应用中的生物安全性，未观察到与插入相关的不良事件和克隆优势。综上所述，该研究为 CAR-T 细胞疗法在白血病治疗中的应用提供了新的思路和方向，为未来的临床实践和研究奠定了坚实基础，有望改善患者的治疗效果和预后。

閹垫捁绁�

娑撳娴囩€瑰宓庢导锔炬暩鐎涙劒鍔熼妴濠団偓姘崇箖缂佸棜鍎禒锝堥樋閹活厾銇氶弬鎵畱閼筋垳澧块棃鍓佸仯閵嗗甯扮槐銏狀洤娴ｆ洟鈧俺绻冩禒锝堥樋閸掑棙鐎芥穱鍐箻閹劎娈戦懡顖滃⒖閸欐垹骞囬惍鏃傗敀

10x Genomics閺傛澘鎼isium HD 瀵偓閸氼垰宕熺紒鍡氬劒閸掑棜椴搁悳鍥╂畱閸忋劏娴嗚ぐ鏇犵矋缁屾椽妫块崚鍡樼€介敍锟�

濞嗐垼绻嬫稉瀣祰Twist閵嗗﹣绗夐弬顓炲綁閸栨牜娈慍RISPR缁涙盯鈧鐗哥仦鈧妴瀣暩鐎涙劒鍔�

閸楁洜绮忛懗鐐寸ゴ鎼村繐鍙嗛梻銊ャ亣鐠佹彃鐖� - 濞ｅ崬鍙嗘禍鍡毿掓禒搴ｎ儑娑撯偓娑擃亜宕熺紒鍡氬劒鐎圭偤鐛欑拋鎹愵吀閸掔増鏆熼幑顔垮窛閹貉傜瑢閸欘垵顫嬮崠鏍掗弸锟�

娑撳娴囬妴濠勭矎閼崇偛鍞撮摂瀣鐠愩劋绨版担婊冨瀻閺嬫劖鏌熷▔鏇犳暩鐎涙劒鍔熼妴锟�