液滴数字 PCR 检测宫颈癌循环 HPV 游离 DNA 的预后价值：印度人群研究成果

　　宫颈癌严重威胁女性健康，传统检测方法存在局限。为探寻更有效的诊断和监测策略，研究人员开展了检测宫颈癌患者循环 HPV 游离 DNA（ccfHPV DNA）的研究。结果显示，ccfHPV DNA 水平与肿瘤大小相关，且 HPV16 检测率更高。这为宫颈癌诊疗提供了新方向123。

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　　宫颈癌，这个隐匿在全球女性健康背后的 “杀手”，是全球女性中第四常见的恶性肿瘤。2022 年，全球有 662301 例新发病例，348874 人因此失去生命；在印度，数据也不容乐观，有 127526 例病例和 79906 例相关死亡。即便 Pap 涂片筛查（一种用于检测宫颈癌的传统方法）已经普及，但因其敏感性有限，在低患病率环境下，平均敏感性仅约 58%，不少无症状的复发情况难以被及时察觉，所以寻找更精准、灵敏的检测手段迫在眉睫。

为了解决这些难题，来自印度全印度医学科学研究所（All India Institute of Medical Sciences，AIIMS）等机构的研究人员开展了一项关于循环人乳头瘤病毒游离 DNA（circulating cell-free HPV DNA，ccfHPV DNA）在宫颈癌中预后价值的研究。该研究成果发表在《Scientific Reports》上。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先是样本采集，他们收集了 2019 - 2022 年在 AIIMS 的 Dr. B.R.A Institute - Rotary Cancer Hospital 接受治疗的 60 例宫颈癌患者的血液样本，这些患者涵盖了不同的疾病阶段，同时采集了 10 例健康女性的血浆样本作为对照。然后利用 Maxwell RSC? ccfDNA Plasma Kit 从血浆中提取游离 DNA（cell-free DNA，cfDNA），并通过液滴数字 PCR（droplet digital PCR，ddPCR）技术对其中的 HPV16 和 HPV18 DNA 进行检测和定量分析。最后，运用 Stata 18.0 软件进行统计分析。

研究结果如下：

1. 患者特征：60 例宫颈癌患者中，非角化鳞状细胞癌（Non-Keratinizing Squamous Cell Carcinomas，NKSCC）患者占比 68.3%（41/60），鳞状细胞癌（Squamous Cell Carcinomas，SCC）患者占比 43.33%（26/60），透明细胞腺癌（Clear Cell Adenocarcinomas，CCA）患者占比 8.33%（5/60）。疾病分期方面，早期（I 期）患者占 8.4%（5/60），II 期患者占 45%（27/60），III 期患者占 45%（27/60），IV 期患者仅占 1.6%（1/60）。
2. 血浆游离 DNA 水平变化：治疗前，宫颈癌患者血浆中 cfDNA 的中位浓度为 9.35 ng/μL；治疗三个月后，显著下降至 7 ng/μL（p = 0.0308）。而健康对照组的中位 cfDNA 浓度仅为 6.95 ng/μL，明显低于宫颈癌患者治疗前后的水平（p < 0.001）。这表明 cfDNA 水平有望成为监测宫颈癌治疗效果和疾病进展的生物标志物。
3. ccfHPV16 和 ccfHPV18 DNA 的检测：在 35 例可分析的患者样本中，HPV18 的检测率为 45.71%，HPV16 的检测率高达 82.86%，二者差异具有统计学意义（P = 0.0012）。进一步分析发现，HPV18 在早期肿瘤中的检测率较低（36.84%），在晚期肿瘤中较高（56.25%）；HPV16 在各期肿瘤中的检测率均较高（早期 84.21%，晚期 81.25%）。在不同肿瘤亚型中，HPV18 在 NKSCC 中的患病率较低（29.47%），在 SCC 中较高（56.25%）；HPV16 在两种亚型中的检测率都较高（NKSCC 中 82.35%，SCC 中 81.25%）。年龄方面，HPV18 在 46 - 59 岁患者中的检测率最高（64.71%），在 60 岁及以上患者中最低（14.29%）；HPV16 在 45 岁及以下患者中的检测率最高（90.91%）。肿瘤大小方面，大于 2 cm 的肿瘤中，HPV18 的检测率为 45.71%，HPV16 的检测率为 84.85%；小于 2 cm 的肿瘤中，二者检测率均为 50%。
4. ccfHPV DNA 水平与临床参数的相关性：研究发现，ccfHPV DNA 水平与患者年龄、组织学亚型无显著相关性，但 ccfHPV16 水平与肿瘤大小存在显著相关性（p = 0.048），这意味着较高的 ccfHPV16 DNA 水平可能与较大的肿瘤相关，反映了疾病晚期更高的病毒载量。

研究结论和讨论部分指出，该研究证实了 ccfHPV DNA 在宫颈癌诊疗中的潜在价值。ddPCR 技术能够有效检测和定量低丰度的 ccfHPV16 和 ccfHPV18 DNA，展现出比传统诊断方法如 Pap 涂片更高的优势。HPV16 的高检测率及其与肿瘤大小的相关性，进一步支持了其作为肿瘤负荷生物标志物的作用。将 ccfHPV DNA 分析整合到临床实践中，有望助力宫颈癌的早期检测、病情监测和个性化治疗。不过，目前仍需进一步研究优化检测方法，在更大、更多样化的患者群体中确认 ccfHPV DNA 的临床效用，开展长期随访研究验证其作为复发早期指标的可靠性，探索其预测患者长期预后的潜力，从而推动 ccfHPV DNA 分析更好地应用于临床，为宫颈癌患者带来更精准、有效的治疗，提高患者的生存率和生活质量。

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