Microglial TLR4-Lyn 激酶：阿尔茨海默病治疗的新希望

　　为探究 TLR4-Lyn 通路在阿尔茨海默病（AD）中的作用，研究人员以 WT、5XFAD 和 5XFAD x Lyn^-/-小鼠为模型开展研究。结果发现 Lyn 激酶可调节 TLR4 诱导的炎症和 Syk 诱导的保护，TLIMs 能改善 AD 症状，为 AD 治疗提供新策略。

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　　在神经科学领域，阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）一直是研究的重点与难点。这种疾病严重影响老年人的认知功能，给患者家庭和社会带来沉重负担。目前，AD 的发病机制尚未完全明确，虽然已知神经炎症在其进程中起着关键作用，但相关具体机制仍迷雾重重。比如，微胶质细胞在 AD 中的作用复杂，其表面的 Toll 样受体 4（Toll-like receptor 4，TLR4）与非受体酪氨酸激酶（non-receptor tyrosine kinases，NRTKs）之间的关系尚不清晰，这就像一座神秘的迷宫，阻碍着科研人员寻找有效的治疗方法。因此，深入研究 AD 中微胶质细胞相关的信号通路，对于揭示疾病机制和开发新疗法至关重要。

为了攻克这一难题，美国库珀大学医学院（Cooper Medical School of Rowan University）和库珀大学医疗保健中心（Cooper University Health Care）的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Scientific Reports》上，为我们理解 AD 的发病机制和治疗提供了新的思路。

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研究人员主要采用了多种技术方法。首先，构建了 WT（野生型）、5XFAD 和 5XFAD x Lyn^-/-小鼠模型，利用这些模型进行体内研究。其次，运用免疫印迹（Western blotting，WB）、免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，co-IP）、免疫组化（immunohistochemistry，IHC）和流式细胞术（flow cytometric，FC）等实验技术，从蛋白水平和细胞层面进行检测分析。此外，还开展了空间转录组学分析，探究基因表达变化。

研究结果如下：

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• TLR4-Lyn 共表达：通过免疫组化、免疫共沉淀和流式细胞术发现，与 WT 小鼠相比，5XFAD 小鼠大脑中 TLR4 和 Lyn 激酶的共定位增加，直接相互作用增强，且疾病相关小胶质细胞（Disease-Associated Microglia，DAM）中 TLR4⁺Lyn⁺的比例更高，表明 AD 发病与 TLR4 表达和 Lyn 激酶活性正相关。
• Lyn 对细胞存活信号的调控：对 5XFAD x Lyn^-/-、5XFAD 和 WT 小鼠脑裂解物进行 WB 分析，发现 5XFAD x Lyn^-/-小鼠中磷酸化 Syk（p-Syk，激活的 Syk）、PI3K、激活的 AKT 和磷酸化 GSK3β 表达增加，说明 Lyn 活性与 Syk 激酶的保护功能呈负相关。
• Lyn 对胶质细胞激活和炎症因子产生的调节：基于微胶质细胞形态分析指数（Microglial Morphology Analysis Index，MMAI），发现 5XFAD x Lyn^-/-小鼠的微胶质细胞更活跃，同时通过染色发现其星形胶质细胞更具反应性，且该组小鼠脑巨噬细胞产生的 TNF-α 和 IFN-γ 水平最高。
• 空间转录组学分析：对小鼠脑切片进行空间转录组学分析，创建了通路相关的热图、主成分分析（PCA）图和火山图。结果显示，5XFAD x Lyn^-/-小鼠微胶质细胞中转录组中，参与吞噬作用的关键基因表达程度更高，有助于理解 TLR4-Lyn 通路在炎症、吞噬作用和细胞存活信号通路中的作用。
• Lyn 对体内吞噬作用的影响：通过对 5XFAD 小鼠进行体内实验，发现 Lyn 缺失使 DAM 数量增加 1.5 倍，微胶质细胞吞噬 Aβ 的能力显著增强。
• Lyn 对神经元损伤和认知功能的影响：对小鼠大脑进行免疫组化染色和认知测试，发现 5XFAD x Lyn^-/-小鼠大脑中营养不良性神经突减少，在 Barnes 迷宫测试中到达目标盒的时间缩短，在新物体识别（Novel object recognition，NOR）测试中探索新物体的时间增加，且神经元细胞数量恢复。
• TLIM 的作用：合成的 TLR4-Lyn 相互作用调节剂（TLR4-Lyn Interaction Modulators，TLIMs）在体外实验中，可降低 Lyn 表达，增加 Aβ 吞噬作用，减少神经元营养不良性神经突，恢复神经元正常形态。

研究结论和讨论部分指出，微胶质细胞 TLR4-Lyn 信号在 AD 中具有重要作用。TLR4 和 Lyn 激酶存在直接相互作用，且在 5XFAD 小鼠中这种相互作用增强。Lyn 激酶通过负向调节 Syk-PI3K 介导的保护作用，抑制炎症、Aβ 吞噬作用和细胞存活信号通路。而 5XFAD x Lyn^-/-小鼠表现出的改善症状，以及 TLIMs 在体外实验中的积极效果，表明靶向 TLR4-Lyn 通路可能是治疗 AD 的有前景的策略。这一研究为 AD 的治疗开辟了新的方向，为后续开发更有效的治疗方法提供了理论依据和实验基础，有望为 AD 患者带来新的希望。

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