靶向敲低回忆激活神经元群中的 NMDA 受体损害远期恐惧消退 —— 解锁恐惧记忆消退的分子密码

　　为探究恐惧记忆消退的分子机制，研究人员开展了以 N - 甲基 - D - 天冬氨酸受体（NMDARs）在远期恐惧记忆消退中作用为主题的研究。结果发现，敲低内侧前额叶皮质（mPFC）和基底外侧杏仁核（BLA）回忆激活神经元群中的 Grin1 基因会损害远期恐惧记忆消退。该研究为理解恐惧记忆消退机制提供了新视角。

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　　在动物的生存与适应过程中，恐惧记忆扮演着重要角色。但当危险过去，及时消除不必要的恐惧记忆同样关键，否则可能引发如创伤后应激障碍（PTSD）等精神疾病。过往研究虽发现内侧前额叶皮质（mPFC）和基底外侧杏仁核（BLA）在恐惧记忆消退训练中作用关键，且回忆激活神经元群的重新激活与远期恐惧记忆消退有关，可具体的分子机制却迷雾重重。

为了揭开这层神秘面纱，韩国基础科学研究所（IBS）的研究人员勇挑重担，展开了一项深入研究。他们将目光聚焦于 N - 甲基 - D - 天冬氨酸受体（NMDARs），试图探究其在远期恐惧记忆消退中的作用。研究成果发表在《Molecular Brain》杂志上，为该领域的发展添上了浓墨重彩的一笔。

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在本次研究中，研究人员运用了多种关键技术方法。首先，借助活动依赖性标记系统与病毒递送的 cre 依赖的 CRISPR - Cas9 系统，精准诱导回忆激活神经元中 NMDARs 的敲低（KD）。同时，通过立体定位手术将病毒混合物注入目标脑区，随后进行电生理学、免疫组织化学等实验，深入分析神经元的变化情况。

下面来详细看看研究结果。
在实验设计与模型构建方面，研究人员选用 8 - 16 周龄的 C57BL6/N、Arc^CreERT2和 LSL - Cas9 小鼠，为实验的顺利开展奠定基础。通过双侧将编码 cre 依赖的 tdTomato 和 SaCas9 盒的腺相关病毒（AAV）注入 Arc^CreERT2小鼠的 BLA 和 mPFC，成功构建了实验模型。其中，SaCas9 盒包含靶向 Grin1 基因外显子 1 的单链引导 RNA（sgRNA）（sgGrin1）或对照 sgRNA（sgGrin1^ATG）。

在 NMDARs 敲低效果验证环节，实验结果令人满意。在 BLA 中，sgGrin1 组 tdTomato 表达（tdT⁺）神经元的 NMDAR 介导电流水平相较于 sgGrin1^ATG组显著降低，这一结果明确表明成功实现了回忆激活神经元中 NMDARs 的敲低。免疫组织化学分析进一步证实了敲低系统的特异性，Cas9 和 tdTomato 蛋白大量共定位，且 tdT⁺神经元中 GluN1 水平明显下降。

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记忆保留与恐惧消退的研究结果则带来了新的发现。在 Retrieval 1 及 Retrieval 1 四周后，sgGrin1 组和对照组的冻结水平并无差异，这意味着 Grin1 敲低并未影响记忆保留。然而，在恐惧消退训练中，sgGrin1 组的消退曲线严重受阻，在 Retrieval 2 时消退效果完全消失，这充分说明 Grin1 敲低对远期恐惧记忆消退造成了显著损害。

回忆激活神经元的反应性研究也有了意外收获。即便敲低了 Grin1，mPFC 和 BLA 中的 tdT⁺神经元在消退后的回忆过程中，对条件刺激（CS）仍保持显著反应，这表明 NMDARs 在这些神经元的重新激活过程中并非不可或缺。

综合研究结果，研究人员得出结论：BLA 和 mPFC 中远期回忆激活神经元群的 NMDARs 对远期恐惧记忆消退至关重要，但在恐惧记忆回忆期间神经元的重新激活过程中并非必需。这一结论意义非凡，它不仅为深入理解恐惧记忆消退的分子机制提供了关键线索，还为开发创伤后应激障碍等相关精神疾病的治疗方法开辟了新方向。后续研究可在此基础上，进一步探究 NMDARs 影响恐惧记忆消退的具体分子通路，有望为攻克此类疾病带来更多突破。

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