JK*01 W.06等位基因启动子多态性与Jk(a+w)弱抗原表型的关联机制研究

　　本研究针对Kidd血型系统弱抗原表型Jk(a+w)的分子机制展开攻关。深圳血液中心团队通过第三代测序技术解析JK*01 W.06等位基因特征，发现76%的Jk(a+w)样本存在Promoter-B多态性，双荧光素酶实验证实其转录活性显著低于Promoter-A。该成果为输血安全提供了新型分子标记，发表于《BMC Immunology》。

　　

在输血医学领域，Kidd血型系统引发的迟发性溶血反应始终是临床难题。英国2022年输血危害报告显示，11/40的溶血反应由抗-Jk^a
抗体引发。更棘手的是，Jk(a+w)弱抗原表型在常规血清学检测中易被误判为Jk(a-)，而酶处理后又会显现弱反应性——中国台湾和深圳的研究分别发现13.33%和7.27%的误判率。这种"隐形威胁"可能导致受体产生抗-Jk^a
抗体，甚至引发致命性溶血反应。

深圳血液中心团队对800名汉族献血者筛查发现20例Jk(a+w)样本（2.5%）。通过流式细胞术和木瓜蛋白酶处理双重验证后，采用第三代测序技术（PacBio平台）解析全长JK基因。关键发现包括：所有Jk(a+w)样本均携带JK*01 W.06等位基因（频率62.5% vs 随机样本34.7%），启动子区存在Promoter-A/Promoter-B两种构型。双荧光素酶实验显示Promoter-B的转录活性显著降低（p=0.0002），这与Jk(a+w)样本中Promoter-B占76%的现象高度吻合。

【主要技术方法】
研究采用微柱凝胶卡检测Jk^a
抗原，流式细胞术定量抗原表达，木瓜蛋白酶处理增强弱抗原检测。通过LR-PCR扩增JK基因全长片段（4对引物覆盖28.3kb），利用PacBio SMRT测序（30×覆盖度）进行单倍型组装。启动子活性通过克隆1.5kb片段至pGL3载体，转染293T细胞后检测荧光素酶活性。

【结果】
Phenotype detection
流式细胞术显示20例Jk(a+w)样本荧光强度介于阴/阳性对照之间，呈现典型剂量效应。酶处理后所有样本均显示弱凝集反应，证实存在Jk^a
抗原。

Genetic analysis
第三代测序发现JK01 W.06等位基因在Jk(a+w)组频率达62.5%，显著高于随机组（34.7%）。鉴定出2个新等位基因JK01.NEW（c.69G>A;c.810G>A）和JK*02.NEW（c.222C>A;c.499A>G;c.588A>G;c.838G>A）。

Promoter sequence analysis
启动子区14个SNP将序列分为Promoter-A（高活性）和Promoter-B（低活性）。Jk(a+w)样本中Promoter-B占比76%，而正常Jk(a+)样本中Promoter-A占76.09%（p<0.0001）。

Transcriptional activity
双荧光素酶实验证实Promoter-A活性显著高于Promoter-B（p=0.0002），与表型差异直接相关。

【结论与意义】
该研究首次阐明JK01 W.06等位基因启动子多态性通过调控转录活性影响Jk^a
抗原表达。Promoter-B的低转录效率是Jk(a+w)表型形成的关键因素，而JK01 W.06的高频携带（中国汉族45.7%）放大了这一效应。这一发现不仅解决了长期争议的c.130G>A（JK01W.01）与表型不符的问题，更建立了"血清学筛查→流式验证→JK01 W.06/Promoter-B基因分型"的三步检测策略。研究成果为精准输血提供了分子诊断靶点，对预防溶血性输血反应具有重要临床价值。