快速检测转基因作物中OsmEPSPS蛋白的免疫层析试纸条开发及其在系统进化分析中的应用

　　为解决转基因作物中OsmEPSPS蛋白的快速现场检测难题，研究人员开发了一种基于双抗体夹心法的免疫层析试纸条（ICS）。该试纸条采用胶体金标记的单克隆抗体mAb #9和检测线包被的mAb #15，可在10分钟内实现0.031 μg/mL的检测限，并兼具高特异性（R2 =0.982）和稳定性。该技术为转基因作物田间筛查和EPSPS基因同源性分析提供了高效工具。

　　

随着转基因作物在全球农业中的广泛应用，草甘膦抗性基因的检测成为监管和育种领域的关键需求。传统方法如PCR和ELISA虽可靠，但存在设备依赖性强、耗时长等缺陷，难以满足田间快速筛查需求。尤其当新型抗性基因如OsmEPSPS（源自水稻的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因）被引入玉米、大豆等作物时，缺乏适配的现场检测工具。

浙江省农业科学院的研究团队在《Analytical Biochemistry》发表的研究中，开发了一种基于免疫层析原理的快速检测试纸条。该技术利用OsmEPSPS特异性单克隆抗体mAb #9（胶体金标记）和mAb #15（检测线包被），结合山羊抗小鼠IgG（质控线），实现了对转基因作物中OsmEPSPS蛋白的灵敏检测。研究还通过农杆菌介导转化获得了OsmEPSPS转基因水稻、玉米和大豆，验证了试纸条的实际应用性能。

关键技术方法

1. 单克隆抗体制备：通过杂交瘤技术获得靶向OsmEPSPS的mAb #9和mAb #15
2. 胶体金标记：将mAb #9与纳米金颗粒共价偶联作为捕获抗体
3. 试纸条组装：采用硝酸纤维素膜、样品垫和吸收垫构建横向流动装置
4. 性能验证：使用转基因作物叶片提取物进行灵敏度（LOD）和特异性测试

Obtaining OsmEPSPS transgenic rice, maize, and soybean
通过农杆菌介导转化获得OsmEPSPS转基因作物。在草甘膦处理试验中，转基因植株可耐受2倍推荐剂量，而野生型植株5-7天内死亡，证实OsmEPSPS蛋白的表达显著提升作物抗性。

Discussion
该ICS技术不仅能检测OsmEPSPS蛋白（检测限0.031 μg/mL），还可识别禾本科植物中同源EPSPS蛋白。其R²
值达0.982，且1分钟内可检出0.817 μg/mL的Eleusine indica样本，为田间快速鉴别和系统进化研究提供新工具。

研究意义
该成果突破了传统检测方法的时间和技术壁垒，首次实现OsmEPSPS蛋白的现场可视化检测。通过颜色响应时间和强度实现半定量分析，不仅适用于转基因作物筛查，还可用于EPSPS基因同源性研究，为抗草甘膦作物的育种和监管提供了创新技术支撑。研究团队特别指出，该试纸条对CP4 EPSPS等常见抗性蛋白无交叉反应，确保了检测的特异性。