基于流式微球竞争抑制法的五价脑膜炎球菌结合疫苗多糖血清群同步鉴定与定量分析

　　为解决脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中异源多糖污染检测难题，印度血清研究所团队开发了流式微球竞争抑制法(BBCIA)，实现了A/C/W/Y/X五类荚膜多糖的同步鉴定及<1%痕量杂质的定量检测。该方法通过荧光微球偶联技术与抗体抑制反应，达到≥90%特异性抑制率和70-130%加标回收率，为多价疫苗质控提供了高通量、高灵敏度的标准化解决方案。

　　

脑膜炎球菌引发的化脓性脑膜炎是全球公共卫生重大威胁，尤其在被称为"脑膜炎地带"的非洲撒哈拉以南地区，血清群A/C/W/X/Y引发的疫情反复肆虐。尽管多糖疫苗和结合疫苗已广泛应用，但现有技术难以满足多价疫苗生产过程中对异源多糖污染的严格质控需求——世界卫生组织(WHO)明确规定，纯化多糖中异源污染物含量必须低于干重的1%。传统检测方法如ELISA、HPAEC-PAD等存在通量低、前处理复杂等局限，亟需开发能同步鉴定多种血清群且精准定量痕量污染的新方法。

印度血清研究所的研究团队在《Journal of Immunological Methods》发表的研究中，创新性地将流式微球竞争抑制法(BBCIA)应用于五价脑膜炎球菌结合疫苗的质控分析。该技术利用Luminex xMAP平台，通过不同荧光编码的羧化微球分别偶联A/C/W/Y/X五种荚膜多糖抗原，与血清群特异性抗体（包括兔源多抗和小鼠单抗）进行竞争抑制反应。未结合的抗体与微球表面抗原结合后，通过检测中位荧光强度(MFI)变化实现定性定量分析。研究特别注重临床样本的覆盖性，测试了纯化多糖、结合中间品和终疫苗三类关键生产阶段的样品。

特异性验证显示该方法对五种血清群的鉴定抑制率均≥70%，交叉反应抑制率≤30%，满足WHO对血清学特异性的要求。在定量分析中，对1%水平异源多糖污染的检测回收率达70-130%，变异系数(CV)<20%，线性范围覆盖0.1-10μg/mL。通过方法学验证证实其检测限(LOD)为0.015-0.14μg/mL，定量限(LOQ)为0.05-0.47μg/mL，且在不同操作条件下保持稳定。

研究团队在讨论部分强调，BBCIA相比传统单重检测具有三大突破：一是单次实验即可完成五类多糖分析，将检测通量提升5倍；二是直接检测完整多糖分子，避免HPAEC-PAD等需降解前处理的局限；三是MFI信号较ELISA显色法灵敏度提高10倍。这些优势使其特别适合多价疫苗生产的在线质控。结论指出该技术不仅满足ICH Q2(R1)验证要求，更建立了首个符合WHO标准的五价疫苗多糖分析方法体系，为包含新发血清群X的疫苗研发提供了关键技术支撑。

这项研究的核心价值在于将流式微球技术的多重检测优势与疫苗质控的精准需求相结合。随着WHO推动将血清群X纳入常规免疫规划，该方法将成为保障多价疫苗质量的关键工具，对实现"2030年战胜脑膜炎"的全球战略目标具有重要实践意义。研究建立的标准化流程已成功应用于印度血清研究所的GMP生产，为其他结合疫苗的质控方法开发提供了范式参考。