犬临床利什曼病中特异性体液免疫缺失的病例研究及其诊断启示

　　本研究报道了三例罕见的犬利什曼病(CanL)临床病例，这些病例虽经细胞学和组织病理学确诊为利什曼婴儿原虫(Leishmania infantum)感染，却表现出特异性体液免疫缺失现象。研究人员通过间接免疫荧光试验(IFAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白质印迹(WB)等多项技术验证了这一特殊免疫状态，强调了在诊断中结合细胞学、组织病理学和免疫组织化学(IHC)等多方法联用的重要性。该发现为临床诊断提供了新视角，对完善犬利什曼病诊断标准具有重要价值。

　　

在犬类健康领域，利什曼病始终是一个令人困扰的难题。这种由利什曼婴儿原虫(Leishmania infantum)引起的寄生虫病，不仅威胁着犬只健康，更因其人畜共患特性成为公共卫生隐患。传统认知中，临床发病犬通常伴随显著的特异性抗体水平升高，这一现象已成为诊断的重要依据。然而，近期来自西班牙萨拉戈萨大学的研究团队在《Acta Veterinaria Scandinavica》发表的研究，却揭示了一个颠覆常规的发现——临床发病犬也可能完全缺失特异性体液免疫应答。

研究背景中，一个长期存在的诊断困境尤为突出：常规血清学检测在部分感染犬中可能出现假阴性结果。这种现象在无症状感染或早期感染阶段尚可理解，但对于已经出现明显临床症状的病例则显得格外反常。现有两种临床分期系统（LeishVet和CLWG）均以抗体水平作为重要分级依据，这使得那些抗体阴性的临床病例陷入了诊断"灰色地带"。更令人担忧的是，人类医学中已有类似病例报道，但在兽医领域却缺乏系统研究。

为解决这一诊断难题，萨拉戈萨大学的研究人员开展了一项深入的病例系列研究。研究团队收集了三例经病理学确诊但血清学阴性的临床病例，包括一只9岁边境牧羊犬（脾肿大）、一只10月龄法国斗牛犬（慢性厌食和吸收不良综合征）以及一只7岁混种犬（皮肤结节和鼻部溃疡性皮炎）。所有病例均通过细胞学或组织病理学观察到巨噬细胞内利什曼婴儿原虫无鞭毛体，并经免疫组织化学(IHC)确认。为全面评估免疫状态，研究采用了包括定量ELISA（灵敏度99.37%，特异性97.50%）、IFAT（灵敏度99.36%，特异性91.94%）和蛋白质印迹(WB)在内的多种血清学检测，同时进行了延迟型超敏反应(DTH)试验评估细胞免疫应答。

关键技术方法方面，研究采用了多平台联合作战策略：通过超声引导脾穿刺获取样本进行细胞学检查；组织病理学结合特殊染色鉴定寄生虫；采用自制兔多抗（稀释1:500）进行IHC确认；定量PCR(qPCR)检测寄生虫DNA；建立包含阳性对照和阴性对照的标准化ELISA和IFAT检测体系；通过皮内注射灭活前鞭毛体悬液评估DTH反应。

研究结果部分，"病例展示"小标题下的发现令人瞩目。病例1的脾脏细胞学检查清晰显示巨噬细胞胞浆内带有明显动基体的利什曼原虫无鞭毛体。病例2的组织病理学呈现严重的肉芽肿性脾炎，经IHC证实巨噬细胞内存在大量利什曼婴儿原虫。尤为特殊的是病例3，虽然常规组织学未发现寄生虫，但IHC却揭示了真皮巨噬细胞内的病原体。所有病例在三种血清学检测(ELISA、IFAT、WB)中均呈阴性，DTH试验在治疗前也为阴性反应。

"讨论与结论"部分提出了几个关键见解。首先，这组病例证实了临床利什曼病可以不伴随特异性抗体产生，这一现象可能与寄生虫诱导的B细胞调节异常有关，类似机制在疟原虫(Plasmodium spp.)和血吸虫(Schistosoma haematobium)感染中已有报道。其次，研究强调了多方法诊断的重要性，特别是当血清学结果与临床表现不符时，应结合细胞学、组织病理学和IHC进行综合判断。值得注意的是，病例3的成功诊断完全依赖于IHC，说明在某些组织病理学阴性的情况下，IHC可能成为确诊的关键工具。

该研究的临床意义深远。一方面，它挑战了现有诊断标准对抗体水平的过度依赖，提示需要重新审视利什曼病的免疫应答谱。另一方面，研究为临床兽医提供了实用的诊断路径——当遇到疑似但血清学阴性的病例时，不应轻易排除利什曼病，而应积极寻求病理学证据。研究团队特别指出，超声引导的脾穿刺作为一种相对安全的采样方式，可有效获取诊断材料，这对临床实践具有重要指导价值。

在治疗反应方面，接受别嘌呤醇(allopurinol)和锑酸葡胺(meglumine antimoniate)联合治疗的病例1和3均表现出良好疗效，进一步验证了诊断的准确性。病例1治疗后脾脏超声恢复正常且qPCR转阴，病例3的皮肤病变完全消退。这些治疗反应不仅证实了诊断的正确性，也为这类特殊病例的管理提供了参考方案。

这项研究最重要的启示在于：犬利什曼病的免疫应答存在比既往认知更复杂的多样性。在免疫调节机制尚未完全阐明的现状下，诊断策略应当更加多元化。研究团队建议，在流行地区对任何不明原因的肉芽肿性炎症病例，都应考虑利什曼病的可能性，即使血清学检测结果为阴性。这一观点将显著提高临床诊断的敏感性，避免漏诊和误诊。